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目的本课题从研究骨纤维异常增殖症(Fibrous dysplasia,FD)中骨吸收和骨形成的表达特征入手,然后制备骨靶向的超支化药物载体,旨在负载G蛋白拮抗剂苏拉明钠,干扰FD的骨髓间充质干细胞,观察其是否能够抑制FD的异常骨形成与骨吸收,从而为临床治疗FD提供理论依据。方法1.通过扫描电镜观察FD及OF的超微结构,并采用免疫组织化学染色、实时定量荧光聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测两者骨形成与骨吸收的差异。2.以三乙醇胺、甲基丙烯酸缩水甘油酯为单体,在氢化钾的催化下合成阳离子型超支化聚酯胺,再加入阿仑膦酸钠(alendronate,ALE)对其进行改性,制备成骨靶向的聚合物胶束。然后利用核磁共振技术(NMR)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、动态光散射(DLS)和透射电子显微镜(TEM)对其进行表征,通过噻唑蓝法检测细胞毒性,羟基磷灰石(HA)吸附实验验证聚合物胶束对骨组织的靶向性。3.制备负载苏拉明钠的骨靶向药物递送系统,通过动态光散射和透射电镜证实是否成功负载苏拉明钠。然后通过噻唑蓝法和生长曲线检测其对FD骨髓间充质干细胞的抑制作用。结果1.FD与OF中都存在活跃的骨形成,但其骨形成方式不同。FD的异常骨形成与早期的正常骨形成类似,但缺乏钙化沉积。而OF骨形成在胶原纤维走形和矿化方面与正常骨形成明显不同。FD中骨保护蛋白(OPG)的表达明显高于OF,OPG在两者中的表达差异具有统计学意义(P<0.05),提示OF较FD有着更活跃的骨吸收。2.通过NMR和FTIR证实了骨靶向的阳离子型超支化聚酯胺Suc-HBPAE-ALE的成功合成,并且具有高度支化结构;GPC结果显示超支化聚酯胺的重均分子质量在9.0*10~3g/mol左右,多分散指数(PDI)约为1.5;DLS和TEM结果显示Suc-HBPAE-ALE胶束尺寸主要集中在60-70nm,达到纳米载药材料要求;HA吸附试验发现,孵育20分钟后有超过80%的Suc-HBPAE-ALE胶束被吸附到HA晶体上面;噻唑蓝法结果显示1mg/ml的Suc-HBPAE-ALE胶束与细胞共培养48h后,细胞存活率仍然高于80%。3.负载苏拉明钠的骨靶向药物输送体系具有良好的可控释放行为和PH敏感性,在中性环境下保持相对稳定,弱酸环境下可快速释放苏拉明钠,40h累积释放量可以达到62.645%。细胞实验表明,100mg/ml的苏拉明钠聚合物药物载体即可起到抑制FD骨髓间充质干细胞增殖的作用。结论1.FD与OF在骨吸收和骨形成方面存在明显差异,OF中的破骨活动较FD活跃,而FD以异常的骨形成为主。2.Suc-HBPAE-ALE具有良好的主动靶向性和生物相容性,可作为治疗骨疾病的骨靶向药物载体。3.负载苏拉明钠的骨靶向药物输送体系具有良好的可控释放行为和PH敏感性,通过抑制FD骨髓间充质干细胞的增殖,能够实现干扰异常骨形成和骨吸收,抑制FD的生长和发展。为临床治疗FD,尤其是PFD和MAS,提供了新的思路。