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子宫颈癌(cervical cancer, CC)是严重危害广大妇女健康的最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率仅次于乳腺癌而位居第二。目前,子宫颈癌的治疗主要是手术切除、放疗、化疗为主,但这些治疗手段并没有明显改善患者的5年生存率,因此探索新的宫颈癌的治疗方法显得尤为重要。近年来肿瘤的基因治疗已成为研究者们关注的焦点,研究表明IL-24基因是一种理想的能够抑制肿瘤生长而对正常组织细胞无明显抑制作用的新基因,国内外对IL-24在宫颈癌治疗方面的研究不多见,为此我们设计了此实验。目的:探讨人白细胞介素(hIL)-24基因重组质粒对人宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其作用机制。方法:1.细胞培养常规方法复苏Siha细胞,接种于含10%胎牛血清的MEM培养液的培养瓶中进行培养;2.建立荷宫颈癌Siha细胞裸鼠皮下移植瘤模型15只BALB/c裸鼠在SPF环境下观察三天后,一般状况良好,第四天收集处于对数生长期的Siha细胞,在无菌环境下以1×107/只密度接种于裸鼠皮下,观察裸鼠移植瘤生长情况及裸鼠一般状况;3.hIL-24基因对人宫颈癌裸鼠移植瘤的影响将成瘤裸鼠随机分为三组(hIL-24重组质粒组,空质粒组,PBS组),每组五只,成瘤后第二天隔日在瘤体内注射预加转染试剂混合的PDC316-hIL-24(10μg),共注射五次,同时以预加转染试剂混合的PDC316 (10μg)和PBS0.2ml作为空载体对照和阴性对照,观察裸鼠移植瘤的生长变化及裸鼠一般状况,测量肿瘤的长径(L)和短径(W),计算肿瘤体积,并根据肿瘤体积的生长情况绘制肿瘤生长曲线;4.肿瘤内末次注射脂质体包裹质粒后七天断颈处死裸鼠,切取瘤体并称重,计算肿瘤抑制率;5.用RT-PCR方法鉴定三组移植瘤细胞中IL-24 mRNA的表达情况采用水饱和酚(Trizol)法提取各组移植瘤细胞总RNA,逆转录合成cDNA。应用相应的引物进行PCR反应扩增基因组中的IL-24以及GAPDH,扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳;6.用流式细胞仪检测移植瘤组织细胞周期将肿瘤组织剪碎成组织匀浆,胰蛋白酶消化,经乙醇固定、加RNase酶消化、碘化丙叮(PI)处理后制成单细胞悬液,上流式细胞仪(FCM)分析。结果:1.成功构建了人宫颈癌Siha细胞裸鼠皮下移植瘤模型,接种细胞后八至十天15只裸鼠皮下肿瘤直径均达0.5cm,肿瘤移植成功率达100%;2.生长曲线图表明IL-24基因重组质粒组移植瘤的体积明显小于空质粒组和PBS组,差异有统计学意义(P<0.05),空质粒组和PBS组移植瘤体积则无明显差异(P>0.05)。与空质粒组和PBS组相比hIL-24基因重组质粒组移植瘤生长缓慢,而空质粒组和PBS组移植瘤生长曲线几乎平行;3.IL-24基因重组质粒组抑瘤效果显著,其抑瘤率为56.5%,差异有显著性(P<0.05),空质粒对肿瘤无抑制作用;4.肿瘤内注射脂质体包裹质粒后,重组质粒PDC316-hIL-24组、空质粒PDC316组及PBS组移植瘤细胞抽提总的RNA,经RT-PCR法检测表明PDC316-hIL-24重组质粒组在620bp的位置可观察到一特异性条带,而空质粒组和PBS对照组均未出现此预期的条带;5.各组移植瘤细胞经流式细胞术检测表明:与空质粒组和PBS组比较,IL-24基因重组质粒组Go/G1期细胞比率明显增多(P<0.05),S期细胞减少,G2/M期细胞减少(P<0.05),提示细胞被阻滞在Go/G1期,空质粒组和PBS组各期细胞百分比则无明显差异(P>0.05)。结论:1.IL-24基因重组质粒具有抑制宫颈癌Siha细胞裸鼠移植瘤生长的作用;2.IL-24基因重组质粒能够将宫颈癌Siha移植瘤细胞阻滞于G0/G1期。