宁夏贺兰山东麓葡萄园酵母菌的分离、鉴定及其耐受性分析

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目前,我国果酒生产多采用来自法国等国家的酿酒酵母菌株,这些菌株由于“水土不服”等问题造成了国产果酒的风味单一,同时使用进口菌株也增加了果酒生产的成本。为此,选育我国本土特色的酵母菌株具有非常重要的意义。贺兰山东麓独特的地理位置、特殊的气候条件、丰富的葡萄品种资源和众多的葡萄酒厂孕育着丰富的酵母菌资源,为选育具有我国特色的酵母菌株提供了宝贵资源。本研究从贺兰山东麓不同地域的9个葡萄庄园中采集成熟葡萄、过熟葡萄、新鲜叶子、干枯叶子、土壤以及自然发酵葡萄汁样品,并从中分离酵母菌,利用WL培养基对分离酵母菌进行形态分类,在此基础上,通过26S r DNA Dl/D2序列分析法对分离酵母菌株进行分子生物学初步鉴定,同时对分离不同种的酵母菌进行酒精、糖、SO2的耐受性分析,具体研究结果如下:本研究共分离酵母菌1066株,经WL培养基形态分类和26S r DNA Dl/D2序列分析法共鉴定14个种,分别为Hanseniaspora uvarum、Issatchenkia terricola、Wickerhamomyces anomalus、Metschnikowia pulcherrima、Saccharomyces cerevisiae、Pichia kudriavzevii、Saccharomycopsis vini、Cryptococcus uzbekistanensis、Cryptococcus albidus、Pichia guilliermondii、Rhodotorula mucilaginosa、Clavispora lusitaniae、Candida zemplinina、Hanseniaspora opuntiae(或Hanseniaspora guilliermondii)。除了在9个葡萄园常出现的S.cerevisiae、W.anomalus、M.pulcherrima、H.uvarum 4种酵母菌以外,各个葡萄园分离酵母菌种存在一定的差异,其中罗山、御马、志辉葡萄园没有分离到这4种以外的酵母菌,贺兰晴雪葡萄园还分离到I.terricola、S.vini。西夏王葡萄园还分离到了C.uzbekistanensis。兰山云昊葡萄园还分离到了C.albidus、P.guilliermondii。华昊葡萄园分离到了R.mucilaginosa和C.lusitaniae。立兰和留世葡萄园都分到了C.albidus。自然发酵葡萄汁中分离到了H.opuntiae(或H.guilliermondii)、C.zemplinina、P.kudriavzevii。葡萄叶子上还分离到了I.terricola、S.vini、C.lusitaniae,R.mucilaginosa、C.albidus。葡萄浆果表面还分离到了C.albidus、P.guilliermondii、C.uzbekistanensis。土壤中只分离到S.cerevisiae和W.anomalus。不同酵母菌株对酒精、糖、SO2耐受能力不同,酵母菌的生长随着酒精、糖、SO2浓度的增加而降低。其中酒精对酵母菌的生长情况影响最大,非酿酒酵母的酒精、糖、SO2耐受能力和酿酒酵母差异不大。对照菌株Angel.S.cerevisiae和S.cerevisiae最大酒精耐受能力分别为12%和8%,非酿酒酵母中P.kudriavzevii酒精耐受能力最大,为10%,其次为H.opuntiae(或H.guilliermondii),酒精耐受力为8%,其余多数非酿酒酵母酒精最大耐受力在6%。非酿酒酵母和酿酒酵母糖耐受能力均在450mg/L左右,多数非酿酒酵母在500mg/L,生长也良好。Angel.S.cerevisiae和S.cerevisiae在SO2浓度为500mg/L时生长良好。M.pulcherrima、P.kudriavzevii、P.guilliermondii、I.terricola的最大SO2耐受浓度为500 mg/L。然而C.albidus、C.uzbekistanensis、R.mucilaginosa、S.vini酒精、糖、SO2耐受性均较差,需做进一步研究。以上研究结果为筛选优良的葡萄酒酿造酵母菌奠定了基础,为宁夏贺兰山东麓特色葡萄酒的开发和研究提供了保证。
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