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目的:研究几种新型咪唑类衍生物的抗肿瘤活性及其作用机理,为这类化合物的进一步开发提供实验基础。方法:以人宫颈癌HeLa细胞为模型,采用MTT法检测咪唑类化合物对HeLa细胞活力的影响,咪唑类化合物分别为2-苯基-5-二苯甲基-1-(3-溴苄基)-1H-咪唑(C2)、2-苯基-5-二苯甲基-1-(2-溴苄基)-1H-咪唑(C5)、2-(3-甲基苯基)-5-二苯甲基-1-(3-溴苯基)-1H-咪唑(C8)和1,2-二-(3-甲基苯基)-5-二苯甲基-1H-咪唑(C10);通过AO/EB法检测咪唑类化合物对HeLa细胞形态学的影响,采用彗星电泳实验检测DNA损伤情况;利用流式细胞术进一步检测咪唑类化合物对细胞凋亡和周期的影响;通过线粒体膜电位、活性氧及ATP含量测定检测细胞凋亡相关事件;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase 3以及PARP的表达;采用MDC染色法和免疫印迹法(p62、Beclin-1和LC3-II/LC3-I)检测化合物对HeLa细胞自噬的影响。结果:(1)MTT实验结果显示,所测试的咪唑类化合物C2、C5、C8和C10都可显著降低HeLa细胞活力,抑制HeLa细胞增殖,其IC50值分别为36.2±1.0、28.3±1.0、29±1.0和33.8±1.1μg/mL。(2)AO/EB染色结果显示,对照组细胞形态正常,细胞核完整,且呈绿色荧光。经上述咪唑类化合物处理后HeLa细胞核质固缩,呈橙色荧光,说明上述化合物可诱导HeLa细胞凋亡。(3)彗星电泳实验结果显示,与对照组相比,经咪唑类化合物处理后细胞出现拖尾现象,说明上述化合物可诱导HeLa细胞DNA损伤。(4)流式细胞术检测结果显示,经咪唑类化合物处理后细胞凋亡比例显著提高,细胞阻滞在G2/M期。(5)经咪唑类化合物处理后,HeLa细胞活性氧水平上升、线粒体膜电位下降、ATP含量降低。(6)MDC染色结果显示,经咪唑类化合物处理后细胞呈明显的绿色荧光,说明上述咪唑类化合物可促进HeLa细胞自噬。免疫印迹结果显示,p62和Beclin-1蛋白表达降低,LC3-II/LC3-I表达上升,进一步说明这些化合物诱导了细胞自噬。(7)免疫印迹结果显示,Bcl-2和Bcl-2/Bax表达降低,Bax、PARP和Caspase 3表达升高。结论:咪唑类新衍生物C2、C5、C8和C10可促进HeLa细胞的凋亡和自噬,表现为活性氧升高、线粒体膜电位水平降低、ATP含量降低。进一步研究发现,这些化合物通过抑制Bcl-2、升高Bax、促进Caspase 3激活而启动凋亡,通过抑制p62和Beclin-1、升高LC3-II/LC3-I来促进自噬。