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【背景】肥胖是当今世界患病率增长最为迅速的代谢性疾病之一,肥胖能够诱导体内代谢功能紊乱、氧化应激损伤、炎症等诸多问题。肝脏是机体脂代谢的重要器官,肥胖的发生发展与肝脏氧化应激损伤、炎症、脂代谢失衡紧密相关。二氢杨梅素(Dihydromyricetin,DHM)是一种从蛇葡萄中提取的酚羟基双氢黄酮类化合物,常用于治疗与炎症和氧化应激损伤相关疾病。近期研究表明,DHM能够增加高密度脂蛋白水平(High-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平并降低高脂血症大鼠的血清总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglycerides,TG)水平。去乙酰化酶(sirtuins,sirt1)和AMP依赖的蛋白激酶(activated protein kinase,AMPK)是两种维持机体代谢平衡的关键能量传感器,SIRT1能够通过上游苏氨酸蛋白激酶(Liver kinase B1,LKB1)依赖方式介导AMPK的作用。研究表明,肥胖状态下,SIRT1-AMPK表达被明显抑制。另有文献报道,SIRT1-AMPK信号通路可能在DHM改善肝脏细胞甘油三酯蓄积、胰岛素抵抗等作用中发挥作用。本课题组前期实验证实DHM能够促进白色脂肪组织棕色化,从而降低高脂饮食诱导的肥胖小鼠体脂及体重。但DHM是否影响肥胖小鼠肝脏脂肪蓄积,目前还不清楚。为此,本课题拟进一步观察DHM对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪沉积的影响,并探讨其可能机制。【目的】探讨DHM是否对高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪沉积有改善作用,其机制是否与氧化应激损伤、炎症、脂代谢失衡有关。【方法】将78只C57BL/6J小鼠随机分成6组(每组13只):1.普通饮食组(Normal diet,ND组):普通饲料喂养,营养成分配比:碳水化合物70%,脂肪10%,蛋白质20%,双蒸水灌胃,每天一次;2.高脂饮食组(High fat diet,HFD组):高脂饲料喂养,营养成分配比:碳水化合物20%,脂肪60%(脂肪以熟猪油为主),蛋白质20%,双蒸水灌胃,每天一次;普通饮食组和高脂饮食组又分别不用或用低剂量二氢杨梅素(125mg/kg/d)和高剂量二氢杨梅素(250mg/kg/d)处理,因此增加四组,分别是:3.普通饮食+低剂量二氢杨梅素组(ND+L-DHM组):普通饲料喂养,二氢杨梅素(125mg/kg/d)灌胃,每天一次;4.普通饮食+高剂量二氢杨梅素组(ND+H-DHM组):普通饲料喂养,二氢杨梅素(250mg/kg/d)灌胃,每天一次;5.高脂饮食+低剂量二氢杨梅素组(HFD+L-DHM组):高脂饲料喂养,二氢杨梅素(125mg/kg/d)灌胃,每天一次;6.高脂饮食+高剂量二氢杨梅素组(HFD+H-DHM组):高脂饲料喂养,二氢杨梅素(250mg/kg/d)灌胃。实验期间,每两周检测体重一次。16周后,眼眶静脉取血并处死动物。全自动生化分析仪检测血脂指标:血清甘油三酯(Triglyceride,TG)、血清总胆固醇(Total cholesterol,TC)、血清高密度脂蛋白(High-density lipoprotein,HDL)、血清低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein,LDL);取肩胛下、腹股沟和附睾处脂肪组织称重后,计算体脂重量。取肝脏甲醛固定、HE和油红O染色检测肝脏脂肪沉积情况;比色法检测肝脏MDA和SOD含量;Realtime PCR检测肝脏炎症相关指标:IL-6、IL-8、TNFα;脂质合成相关基因:乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)、固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1)、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthetase,FAS);脂质分解相关基因:过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha,PPARα)、棕榈酰转移酶1(Carnitine palmitoyltransferase 1,CPT1);及调节脂质合成与分解代谢相关基因:SIRT1和AMPK的基因表达。Western Blot检测肝脏SIRT1、AMPK及SIRT1-AMPK调节的脂质合成(ACC、SREBP-1、FAS)和分解代谢相关基因(PPARα、CPT1)的蛋白表达水平。【结果】与ND组相比,HFD组小鼠体重、体脂显著增加;TG、TC、LDL水平增加,HDL水平降低;HE染色和油红O染色结果显示:肝细胞体积增大、脂滴数量增加和肝脏内脂肪沉积增加;比色法检测显示:肝脏MDA显著增加、SOD活力显著下降;定量PCR结果显示:炎症因子IL-6、IL-8、TNFα表达增加,脂肪合成因子(SREBP-1c、FAS、ACC1)mRNA表达增加,脂肪分解相关因子(PPARα、CPT1)表达下降及SIRT1和AMPKmRNA表达下降;Western blot结果显示:SIRT1和AMPK的蛋白表达显著降低,脂质合成因子(SREBP-1c、FAS、ACC1)蛋白表达量增加,脂质分解相关因子(PPARα、CPT1)蛋白表达下降。DHM能显著逆转HFD组小鼠上述指标的改变;但DHM对ND小鼠上述指标无显著影响。【结论】DHM改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠肝脏脂肪沉积,其机制可能与抑制氧化应激、炎症和脂质合成,促进脂质分解有关。