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目的:脑血管病是导致全球人类致残和致死的主要病因之一,其中急性缺血性脑卒中最为常见。脑缺血急性期会发生继发性脑损伤:钙超载、氧化应激、炎症、凋亡、兴奋性中毒,其中氧化应激和炎症的发生于血脑屏障的破坏密切相关,血脑屏障破坏又进一步加剧脑损伤,形成恶性循环,减少继发性脑损伤和保护血脑屏障对脑缺血的治疗至关重要。因此,开发保护血脑屏障的药物有望成为缺血性卒中的有效策略。茴香脑(Anethole,简称AN)又名茴香醚,来源于伞形科植物茴香、果实香根芹、根木兰科植物八角茴香、果实柏科植物、果实唇形科植物罗勒、全草藿香、全草菊科植物紫苑根及根茎。在肿瘤、皮肤损伤、肝损伤等方面均有抗炎作用,本实验复制小鼠永久性大脑中动脉栓塞模型(permanent middle cerebr alanery occlusion,p MCAO),应用茴香脑进行干预,评价茴香脑对脑缺血的抗炎作用,和血脑屏障的保护作用,旨在证实其脑保护作用并探讨其可能机制。方法:采用成年健康雄性的CD-1小鼠,应用改良Longa线栓法制作的小鼠永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO)模型。1.实验一探究茴香脑对脑梗死急性期小鼠的神经保护作用。72只小鼠被随机分为四组(每组18只):Sham组,p MACO组,AN低剂量组(p MACO+AN 40mg/kg),AN高剂量组(p MACO+AN 80mg/kg)。茴香脑干预组在小鼠大脑中动脉栓塞后给药方式为即刻给予腹腔注射,而相应的p MCAO组和Sham组则给予等体积的吐温溶剂。各组小鼠(每组6只)进行缺血后脑保护作用的检测:包括24小时的神经功能评分,24小时伊文思蓝含量测定,24小时脑水含量测定以及24小时TTC染色法测定梗死体积。2.实验二对茴香脑在脑梗死急性期小鼠的脑保护及血脑屏障保护作用机制的探索。各组小鼠(每组6只)用蛋白免疫印迹法进行测定缺血后24小时的炎症因子的水平,评价AN在脑梗死急性期抗炎作用。测定缺血后24小时的Claudin-5、Occludin和JAM-1蛋白表达量,评价AN保护血脑屏障的作用。结果:1茴香脑能改善小鼠脑梗死急性期的神经功能缺损术后24小时,对Sham组、p MCAO组、AN低剂量组、AN高剂量组的小鼠进行神经功能的评分,应用Mann–Whitney U检验进行统计分析。其中,除Sham组以外,其余小鼠(缺血后小鼠)均出现评分不同的左侧肢体偏瘫,且神经功能评分明显升高。而药物干预的AN低剂量组和AN高剂量组神经功能评分明显低于p MCAO组,且具有明显的统计学差异(P<0.05)。提示茴香脑能改善小鼠脑梗死急性期的神经功能缺损。2茴香脑能降低小鼠脑梗死体积术后24小时,在p MCAO组和其他脑缺血小鼠出现苍白色梗死区域。与p MCAO组相比,AN低剂量组和AN高剂量组的脑梗死体积明显减小,且差异具有统计学意义(p MCAO vs.L-AN,H-AN:73.62%±4.83%vs.38.36%±1.16%,43.19%±1.09%,P<0.05),其中,低剂量组比高剂量组的脑梗死体积减少的多,但其差异并无统计学意义(P>0.05)。提示茴香脑能够降低局灶性脑缺血小鼠的脑梗死体积。3低剂量茴香脑能减轻小鼠脑梗死急性期24小时的脑水肿术后24小时,Sham组小鼠梗死侧的脑组织水含量为82.92%±1.11%。而p MCAO组小鼠梗死侧的脑组织含水量明显升高至87.81%±0.82%(24小时)(P<0.05)。给予低剂量茴香脑干预后,脑梗死24小时的脑组织含水量分别降至86.29%±1.31%,与p MCAO组相比,其差异均有统计学意义(P<0.05)。提示茴香脑能减少局灶性脑缺血小鼠脑水含量,减轻小鼠脑梗死急性期的脑水肿。4低剂量茴香脑能够改善小鼠脑梗死急性期血脑屏障的通透性术后24 h,通过测量各组小鼠脑中伊文斯兰的漏出量,用来评价血脑屏障的通透性。其中蓝色区域表示伊文斯兰的漏出的多少,提示血脑屏障通透性的改变。低剂量茴香脑干预后,小鼠缺血侧脑组织的伊文斯兰透过量明显低于p MCAO,其差异有统计学意义(P<0.05)。提示低剂量茴香脑能够改善小鼠脑梗死急性期血脑屏障的通透性。5低剂量茴香脑对小鼠脑梗死急性期发挥抗炎作用术后24小时,与Sham组相比,p MCAO组小鼠缺血侧皮层脑组织匀浆中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)均明显升高,而AN低剂量组可明显减少炎症因子含量,其差异具有统计学意义(P<0.05)。说明茴香脑可以在小鼠脑梗死急性期发挥抗炎作用,从而起到脑保护的作用。6低剂量茴香脑对小鼠脑梗死急性期血脑屏障的Claudin-5、Occludin和JAM-1蛋白表达量的影响术后24小时,与Sham组相比,p MCAO组小鼠缺血侧皮层脑组织匀浆中的Claudin-5、Occludin和JAM-1蛋白表达含量均降低,其差异具有统计学意义(P<0.05)。而茴香脑干预后,脑组织中Claudin-5、Occludin和JAM-1蛋白表达含量较p MCAO组均有所升高,其差异具有统计学意义(P<0.05)结论:我们的研究发现:茴香脑具有脑保护作用,能降低小鼠脑梗死急性期的神经功能缺损,减小脑梗死体积,同时减轻脑水肿。进一步研究发现,茴香脑能够减轻小鼠脑梗死急性期血脑屏障的通透性,上调Claudin-5、Occludin和JAM-1的表达量,同时减少炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)的含量。我们推断,茴香脑可以通过抗炎作用,保护血脑屏障,减轻脑水肿,进而保护缺血性脑组织。这是首次发现茴香脑对缺血性脑卒中具有神经保护和血脑屏障保护作用,为开发治疗脑梗死的新型药物,尤其是植物提取物提供了前景。