论文部分内容阅读
目的研究癫痫发作期、终止发作期及终止发作后7天内大鼠脑内谷氨酸(Glu)、谷氨酸转运体mRNA (EAAT1-mRNA)及谷氨酸转运体蛋白(EAAT1-P)表达的动态变化规律。分析癫痫发作全过程中激活GABAc受体后对癫痫发作、痫性放电和大鼠脑内海马区Glu、 EAAT1-mRNA表达及EAAT1-P含量变化的影响,探讨GABAc受体在癫痫发作过程中的作用及作用机制。方法采用健康成年Sprague-Dawley (SD)大鼠运动皮层定位注射青霉素(Penicillin, PNC)诱导癫痫发作模型,应用RM6240C型多道生物信号采集处理系统同步记录癫痫大鼠皮层脑电图(EcoG),以GABAA受体阻断剂荷包牡丹碱(Bicuculline, BIC)、GABAB受体阻断剂高牛黄酸(Homotaurine,3APS)和GABAc受体激活剂蝇蕈醇(Muscimol, MUS)为工具药,癫痫发作持续时间和Racine痫性行为学分级作为效应指标。分别于癫痫发作高峰,在阻断GABAA,B受体条件下腹腔注射MUS,分析激活GABAc受体后对癫痫活动及EcoG痫样波潜伏期、发放频率、最高振幅的影响。采用免疫组化法测定癫痫发作高峰期及发作终止后即刻、发作后的1、2、3和7天海马区Glu和EAAT1-P含量；采用实时荧光定量聚合酶链反应(syble-green Rt-PCR)技术在相同时间点测定EAAT1-mRNA表达变化。结果(1)大鼠运动皮层定位注射PNC后,成功诱导癫痫发作,均出现癫痫样脑电和痫性行为,表现为Ⅰ～Ⅲ级发作。腹腔注射GABAA,B受体阻断剂后,大鼠癫痫发作程度显著增强,发作持续时间明显延长,痫样放电频率和棘波振幅明显加大,与PNC组比较,差异均有显著性(P皆<0.05)。应用MUS后,观察到大鼠癫痫发作程度明显减轻,发作持续时间明显缩短,相同时间点内痫样波发放频率明显减少,痫样波最高振幅也得以降低,分别与PNC组及GABAA,B受体阻断剂组(GAB组)比较,差异均有显著性(P皆<0.05)。(2)癫痫发作高峰期,PNC组大鼠海马区Glu含量明显升高,与正常组比较差异有显著性(P<0.05)；与PNC组比较,GAB组Glu含量进一步升高(P<0.05),而给予MUS后Glu含量低于GAB组(P<0.05)；癫痫发作终止时,PNC组、GAB组和MUS组Glu含量与各组所对应的发作高峰期相比均显示降低,差异均有显著性(P皆<0.05)。终止发作后的1-7天内仍呈持续下降趋势,且无反弹。其中MUS组下降更为明显和迅速,癫痫发作终止时及终止后的1-3天内Glu含量均低于PNC组和GAB组,差异均有显著性(P皆<0.05)。MUS组在第2天时已经接近正常水平(P>0.05),PNC组第3天基本恢复正常水平(P>0.05)；而GAB组至第7天回复至正常水平(P<0.05)。(3)癫痫发作高峰期,PNC组大鼠海马区EAAT1-P表达量明显降低,同正常组相比有显著性差异(P<0.05)；给予GABAA,B受体阻断剂后,在GAB组和MUS组内EAAT1-P表达量与PNC组比较进一步降低(P<0.05)；癫痫发作终止时,PNC组、GAB组和MUS组EAAT1-P表达量与各组的发作高峰期相比,明显升高,差异均有显著性(P皆<0.05)。终止发作后的1-7天内各组的EAAT1-P表达量呈持续升高趋势。尤其在癫痫发作终止时及终止后的1-3天内,以MUS组EAAT1-P表达量升高幅度最为明显和迅速,与PNC组和GAB组比较,差异均有显著性(P皆<0.05)。MUS组在终止时刻即接近至正常水平(P>0.05),在2-7天内,继续增加并高出正常值,但无统计学意义(P>0.05)。PNC组d1时基本恢复正常水平(P>0.05),在3-7天时,继续升高并超过正常值,但无显著性差异(P>0.05)。而GAB组至第7天仍低于正常水平,但差异无显著性(P>0.05)。(4)癫痫发作高峰期,PNC组大鼠海马区EAAT1-mRNA表达量较正常组明显降低,且具有显著性差异(P<0.05),给予GABAA,B受体阻断剂后,在GAB组和MUS组内EAAT1-mRNA表达量与PNC组比较进一步降低(P<0.05)；GAB组EAAT1-mRNA表达量与PNC组比较进一步降低(P<0.05)；癫痫发作终止时,PNC组、GAB组和MUS组EAAT1-mRNA表达量与各组所对应的发作高峰期时比较,均显示升高,差异有显著性(P<0.05)。终止发作后的1-7天内各组均呈持续回升趋势。其中以MUS组的升高趋势最为明显和迅速,癫痫发作终止时及终止后的1-3天内EAAT1-mRNA表达量均高于GAB组,差异均有显著性(P<0.05)。MUS组在第2天时已经恢复至正常水平(P>0.05),PNC组第3天接近正常水平(P>0.05),而GAB组于第7天恢复至正常水平(P>0.05)。结论(1)大鼠运动皮层定位注射PNC能成功诱导癫痫发作,当阻断GABAA,B受体后,导致癫痫发作程度增强,发作时间延长,激活GABAc受体后,能终止PNC与GABAA,B受体阻断剂协同诱发的痫性放电和癫痫发作。(2)PNC诱导癫痫发作过程中,海马内Glu含量显著升高,EAAT1-P含量以及EAAT1-mRNA表达明显降低；癫痫自行终止发作过程中,Glu含量降低而EAAT1-P含量、EAAT1-mRNA表达明显回升,使终止发作；癫痫自行终止发作后7天内,Glu持续降低而EAAT1-mRNA表达增加,EAAT1-P含量持续升高,未见复发；(3)激活GABAc受体后,促进脑内Glu含量持续降低,同时使EAAT1-mRNA表达增加而EAAT1-P含量随之进一步升高,增强突触间隙Glu摄取,降低CNS兴奋性是其产生抗癫痫作用的机制。此外,由于EAAT1-mRNA表达持续增加,EAAT1-P含量不断上调,使突触间隙中Glu含量持续保持低水平状态,是防止癫痫复发的原因。