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肝纤维化（hepatic fibrosis,HF）是由多种慢性损伤肝脏的因素（包括慢性乙型肝炎和丙型肝炎感染，酒精和非酒精性脂肪性肝炎等）袭击肝脏，肝脏对伤口作出愈合反应形成的。大量文献指出，在肝纤维化的发生及发展过程中，肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化和增殖是其核心要素，因此探讨抑制肝星状细胞活化及增殖的方法对肝纤维化的治疗具有重要意义。 TIPE2，肿瘤坏死因子（TNF）-α诱导蛋白8样2（TNFAIP8L2），在调节炎症和免疫稳态中起重要作用。最近的研究发现TIPE-2参与了多种肿瘤和增殖性疾病的发生发展，这些可能与其对Wnt蛋白（包括β-Catenin及其下游分子（Cmyc和CyclinD1））的下调有关。然而众所周知，Wnt蛋白的激活能够显著地促进肝星状细胞的活化和增殖。TIPE-2是否能通过抑制Wnt蛋白的表达从而抑制肝星状细胞的活化和增殖，进一步抑制肝纤维化，目前还没有相关研究。 为了探讨TIPE-2是否在肝纤维化进程中起着一定的作用，课题组检测了TIPE-2在CCl4诱导的肝纤维化小鼠原代肝星状细胞以及TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞中的表达变化；并且通过向HSC-T6细胞中转染质粒和siRNA实现对TIPE-2的过表达和沉默，检测其对肝星状细胞的活化和增殖的影响。 实验分以下4个部分： 1.TIPE-2在CCl4诱导肝纤维化小鼠原代肝星状细胞中的表达变化 雄性C57BL/6小鼠背部皮下注射20%CCl4橄榄油溶液，每周2次，持续4周以致小鼠肝纤维化模型；通过H&E染色、Masson染色、ALT检测、AST检测以及星状细胞活化标志物（Col1α1和α-SMA）的表达测定来判定模型建立成功。在此基础上用免疫组化对TIPE-2的表达进行定位，QPCR以及Western Blot检测TIPE-2 mRNA和蛋白的表达量。结果发现：TIPE-2在CCl4诱导的肝纤维化小鼠原代肝星状细胞中表达下降。 2.TIPE-2在TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞中的表达变化 用不同浓度的TGF-β1溶液（5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml）刺激HSC-T6细胞，经过24h的活化后，使用QPCR和Western Blot来对TIPE-2 mRNA及蛋白的表达水平进行检测。结果发现：在用TGF-β1诱导活化的HSC-T6细胞中，TIPE-2表达明显降低，且降低程度与TGF-β1浓度成正比（15ng/ml降低程度最低）。 3.通过转染质粒实现TIPE-2在HSC-T6细胞的过表达，观察其对HSC-T6活化和增殖的影响 通过应用QPCR和Western Blot，对HSC-T6活化标志物（主要是Col1α1和α-SMA）的表达变化进行检测，运用MTT和流式细胞仪对HSC-T6细胞的细胞活力和细胞周期分布进行检测，从各方面说明过表达TIPE-2对HSC-T6细胞活化及增殖的作用；同时应用Western Blot进一步检测TIPE-2过表达对Wnt蛋白表达的影响。结果发现：过表达TIPE-2可以通过阻碍Wnt蛋白的表达来逆转TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化。 4.通过转染si-RNA实现TIPE-2在HSC-T6细胞的沉默，观察其对HSC-T6细胞活化和增殖的影响 通过应用QPCR和Western Blot对HSC-T6活化标志物（主要是Col1α1和α-SMA）的表达变化进行检测，运用MTT和流式细胞仪对HSC-T6细胞的细胞活力和细胞周期分布变化进行检测等研究证明TIPE-2沉默对HSC-T6细胞活化及增殖的作用；同时应用Western Blot进一步检测沉默TIPE-2对Wnt蛋白表达的影响。结果提示：沉默TIPE-2可以通过上调Wnt蛋白的表达来促进TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化。 结论：TIPE-2可以通过下调Wnt蛋白的表达来抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞活化和增殖从而在肝纤维化过程中发挥着保护作用。