埃及伊蚊(Aedes aegypti)甾醇载体蛋白-2的生理功能及转录调控研究

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胆固醇(cholesterol)是昆虫细胞膜的重要组成成分和调控昆虫生长发育的蜕皮激素生物合成的前体。昆虫缺少胆固醇合成的关键性酶,不能自身合成胆固醇,只能依靠食物来源的胆固醇来满足机体生长和发育的需要,因此胆固醇的吸收和转运是昆虫不可缺少的生理过程。甾醇载体蛋白(sterol carrier protein-2, SCP-2)在昆虫胆固醇和脂类的运输过程中扮演着非常重要的角色。目前有关SCP-2的研究主要集中在脊椎动物中进行,昆虫SCP-2的研究报道还较少。埃及伊蚊甾醇载体蛋白-2(AeSCP-2)是第一种被研究的昆虫甾醇载体蛋白,研究表明该蛋白在双翅目昆虫蚊子的胆固醇运输过程中起着重要作用。所以,基于SCP-2在昆虫中的重要功能,以SCP-2这类与昆虫营养物质代谢相关的重要蛋白为营养靶标,可以开发和研制新型的农药用于农业昆虫和害虫的防治。论文首先以埃及伊蚊(Aedes aegypti),俗称黄热病蚊(yellow fever mosquito),一种传播登革热(dengue hemorrhagic fever, DHF)和黄热病(yellow fever, YF)的病媒蚊,为研究对象,在世界上首次建立了一种简单而有效的DNA载体导入法。该方法利用蚊子卵黄生成时的生殖生理特点,结合高效的体内转染试剂,不用直接操作胚胎,就可介导外源DNA垂直进入胚胎中。因此无需建立转基因蚊子品系,就能在蚊子体内进行可诱导的基因过表达和表达抑制研究。此方法为蚊子的大规模的功能基因组研究提供了崭新而高效的体内研究手段。利用所建的新方法,本文针对埃及伊蚊甾醇载体蛋白-2(AeSCP-2)开展了以下的研究:(1)与RNA干扰相结合,对埃及伊蚊甾醇载体蛋白-2(AeSCP-2)基因功能进行了体内研究,进一步证实了AeSCP-2在埃及伊蚊生长发育过程中的重要生理功能。(2)对AeSCP-2基因的启动子进行了体内功能研究,对AeSCP-2基因转录调控做了深入探讨。通过研究,不仅确定了AeSCP-2基因启动子的重要调节区域,而且发现了两种转录因子THAP和ATF2,能与启动子的该调节区域相结合,分别正向和负向调节SCP-2启动子的活性,从而调控SCP-2基因的表达。另外,THAP和ATF2的体内表达抑制研究初步证明了这两种转录因子在埃及伊蚊发育过程中的重要功能。该研究不仅为AeSCP-2基因调控的研究奠定了重要的基础,而且为蚊虫传播疾病的媒介控制发展了新的作用靶标(THAP)。针对新的靶标,可以筛选出更多有效的抑制剂,以开发成新型杀虫剂用于蚊虫的防治。另外本研究还为其它昆虫营养靶标的研究提供借鉴与参考,为开发新农药提供了重要的理论依据。
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