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鸡球虫为孢子虫纲、真球虫目、艾美耳科、艾美耳属的一类，是严格的细胞内寄生虫，每年都造成养鸡业巨大经济损失。其中柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)是主要的鸡球虫之一，寄生于鸡盲肠内，引起鸡血便，死亡和饲料利用率降低。E. tenella和其它顶复门寄生虫一样能依赖于肌动蛋白骨架有效而且快速地入侵宿主细胞。肌动蛋白骨架包括肌动蛋白(actin)家族和肌动蛋白相关蛋白(actin related proteins，ARPS)家族。肌动蛋白解聚因子(actin depolymerizing factor，ADF)是肌动蛋白相关蛋白的一类，广泛存于真核细胞中的肌动蛋白调节蛋白，通过切断肌动蛋白纤丝和增加肌动蛋白纤丝解聚作用来重塑细胞骨架，进而影响细胞生长、运动、凋亡及胚胎发育等重要生理功能。本研究以：Etactin和ADF为对象，在国内外首次初步探讨其在球虫细胞入侵中的作用，主要研究成果如下：
1.E. tenella ADF基因的克隆和表达通过PCR首次克隆获得了EtADF基因，其ORF序列长354bp，编码118个氨基酸，预测分子量为13.14kDa；表达融合蛋白分子量为33.14kDa；纯化得到了可溶性ADF，并且获得了抗体滴度为1：5120的兔抗ADF多克隆抗体。克隆获得了E. tenella和E necatrix ADF基因组序列，比较两种序列发现，EtADF基因组和EnecatrixADF基因组相似性为92.5％，差异主要位于内含子部位，而编码区仅有4个核甘酸不同。通过DNAstar软件包中的Megalign程序计算序列相似性，结果表明EtADF和T．godnii ADF相似性最高为69.1％，而与其它物种的ADF序列相似性都低于36.4％。进化分析结果表明EtADF和T．gondii ADF位于进化树同一分支上。在结构上EtADF具有与其它真核生物相似高度保守的a螺旋和β折叠构构象；与酵母cofilin比较，EtADF具有actin单体结合的位点，但是缺失与actin纤丝结合的a螺旋序列。EtADF没有信号肽序列，没有核定位信号序列，有Ser3磷酸化位点。实验表明EtADF能够结合Etactin单体。 2.EtADF表达动态、EtADF和actin细胞定位分析在mRNA和蛋白水平研究了EtADF和Etactin在E. tenella不同生活阶段的表达动态。首先通过RT-PCR和Southern blot证实了EtADF和Etactin mRNA在球虫子孢子、裂殖子、未孢子化卵囊和孢子化卵囊都有所表达。Northern blot证明了在球虫子孢子、裂殖子、未孢子化的卵囊和孢子化的卵囊中只存在一种EtADF和Etactin mRNA．剪切形式。然后用real-time q-PCR检测艾美耳球虫不同生活阶段ADF tuRNA表达量，结果显示ADF mRNA在未孢子化和孢子化卵囊中表达量均显著低于在子孢子和裂殖子中的表达量。Dot Blot实验表明，Etactin在E. tenella不同生活阶段蛋白质表达水平相似；而未孢子化卵囊和孢子化卵囊中ADF蛋白质表达量显著低于子孢子和裂殖子中ADF蛋白质表达量。这些结果表明E. tenella不同生活阶段ADF表达可能是在转录水平上调节。荧光定位发现，EtADF和Etactin分布于整个子孢子细胞内，但是它们主要位于子孢子细胞膜附近。细胞松弛素B能够改变子孢子Etactin分布情况，使其均匀分布于细胞内。
3.Etaetin基因的克隆和表达通过PCR首次克隆获得了E. tenella的actin基因，其ORF大小为1128bp，编码376个氨基酸，预测分子量为42.7kDa：表达融合蛋白分子量为62.7 kDa；纯化得到了可溶性actin，并且获得了抗体滴度为1：5120小鼠抗actin多克隆抗体。通过DNAstar软件包中的Megalign程序计算序列相似性，结果表明Etactin和T．godnii actin的相似性最高，达到95.7％，Etactin和其它序列的相似性都大于83.0％。使用Phylip3.67对寄生虫actin氨基酸序列进行进化分析，其结果表明Etactin和T．gondii actin位于进化树同一分支上。空间结构模拟表明Etactin的三维结构可分为外部结构域和内部结构域，又可以细分为4个亚结构域(亚结构域1-4)，与ADF结合的位点主要位于亚结构域1和3上。Etactin具有和ATP/ADP结合位点；亚结构域2中存在一个DNase Ⅰ结合环。
4.鸡肾细胞培养和球虫子孢子入侵鸡肾细胞研究分析以培养鸡肾原代细胞为模型研究Etactin和EtADF在宿主细胞入侵中功能机制。以抗子孢子裂解抗原，抗重组EtADF和Etactin的多克隆抗体与子孢子同时加入细胞培养也液中共同培养，结果表明，兔抗子孢子裂解抗原的多克隆抗体能够阻断E. tenella子孢子入侵细胞；而小鼠抗actin多克隆抗体和兔抗ADF多克隆抗体完全不能阻断Etenella子孢子入侵细胞。不同剂量的细胞松弛素B和LY294002在体外都能显著抑制E.tenella子孢子入侵鸡肾细胞，而lavendustin C在高剂量时才能显著抑制子孢子入侵鸡肾细胞；ML-7完全不能抑制子孢子入侵鸡肾细胞。