膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma,TCC)是常见的恶性肿瘤之一,在我国膀胱移行细胞癌的发病率位于男性肿瘤的第八位,女性肿瘤的第十位,占泌尿系统肿瘤的首位。TCC手术后有很高的复发率,复发后肿瘤恶性程度增加,造成转移,危及患者生命。 国外学者曾经应用比较基因组杂交技术(Comparative genomichybridization,CGH)和微卫星分析技术(Microsatellite analysis,MA)对膀胱癌的进行了研究,得出的结果差异很大,而且对于复发性膀胱癌很少有文献报道过。为明确高膀胱移行细胞癌复发的分子细胞遗传学机制,本研究选择我院泌尿外科1996年1月～2003年8月的膀胱癌住院患者石蜡包埋标本,经随访、筛选,分为高复发组和无复发组。应用比较基因组杂交技术对每例标本进行检测,经过统计分析,得出高复发组膀胱癌染色体畸变的区段或位点。然后在这些区段或位点上选择适当的微卫星DNA位点,进行PCR扩增,电泳后得出微卫星变异的确定信息。 复旦大学肝癌研究所曾经在研究不同转移潜能人肝癌细胞模型中,建立过比较基因组杂交技术的平台。我们应用的是间接法CGH技术,这种方法,步骤很多,操作繁琐,但是灵敏度高,背景低,对于石蜡包埋组织不能用直接法标记进行杂交。对于间接法CGH,尤其是利用石蜡包埋组织进行CGH,国内文献没有相关的报道,国外文献报道的也不多,所以很多实验条件需要进一步摸索。我们改进了石蜡组织提取基因组DNA的方法,提高了产量和纯度。同时,我们应用DNA酶酶切配合广泛标记系统(Universallinkage system,ULS)进行标记探针,并按1∶1的量与缺口平移法标记的探针进行对比实验,以调整探针的量。 我们采用了基于多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)的方法对石蜡包埋组织DNA进行微卫星分析,并应用毛细管电泳、配合相关分析软件来分析各个位点的变异情况,最终得出染色体畸变的大致位置,为今后的全基因组扫描、寻找“膀胱癌复发相关基因”做前期工作。