谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70表达的影响

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本试验用不同剂量的谷氨酰胺(Gln)体外培养奶牛乳腺上皮细胞,分别检测在正常培养温度和高温应激条件下细胞的生长、增殖情况及HSP70mRNA的表达水平,旨在探讨不同剂量的G1n对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长、增殖、减缓应激损伤的作用及其与细胞HSP70mRNA的表达的关系。本研究分为两个部分:一、不同浓度的谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70mRNA表达的影响收集37℃,细胞培养基中G1n添加剂量依次为0,0.0625,0.25,0.5,2,4,8mmol/L的奶牛乳腺上皮细胞及细胞培养液,利用MTT法检测细胞增殖,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,RT-PCR分析Bcl-2/Bax及HSP70mRNA的表达量。进而研究Gln对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞生长、增殖的作用及其与热休克蛋白(HSP)70表达的关系。本研究结果表明,体外培养的奶牛乳腺上皮细胞其活性受Gln添加剂量的影响。Gln添加剂量为2mmol/L时,检测的细胞增殖能力最强,Bcl一2/Bax mRNA表达量比值最高,说明此添加剂量细胞活性最好。Gln对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞HSP70mRNA的表达有诱导作用,这种作用随G1n剂量的增加而增加。二、高温应激条件下谷氨酰胺对奶牛乳腺上皮细胞生长与增殖及HSP70mRNA表达的影响本试验对乳腺上皮细胞进行37℃.39℃.41℃.43℃四个不同温度处理,根据细胞应激损伤程度筛选出热应激温度;对细胞进行0~8mmol/L不同剂量Gln预处理,再施加41℃高温处理,分别检测细胞的生长增殖情况及HSP70mRNA(?)勺表达量。旨在探讨不同温度对细胞的损伤情况和在高温应激条件下Gln对细胞生长、增殖、减缓应激损伤的作用,及诱导表达的HSP70对细胞应激损伤的作用。结果表明,以37℃培养条件为对照组,随着处理温度的增加细胞的凋亡率显著增加,其中以43℃最显著,41℃次之,39℃最轻。在41℃条件下,Gln添加剂量为0~0.25mmol/L时,对细胞增殖的抑制作用最明显,添加剂量为4和8mmol/L时能够提高细胞的活性;Gln添加剂量为0-0.5mmol/LG1n时,HSP70mRNA表达量低干对照组:添加剂量为4和8mmol/L时,HSP70mRNA表达量与对照组相比较分别提高了50.62%、91.56%,差异极显著,高剂量的Gln和高表达的HSP70能提高应激状态下细胞的活性。
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