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目的:
1.研究不同剂量的X射线诱发大鼠淋巴细胞TCR基因突变的辐射剂量--效应关系。
2.探讨整体和离体照射致大鼠淋巴细胞TCR基因突变的一致性,以明确TCR突变分析技术离体实验能否客观准确的反映整体照射的情况,为该技术应用于生物剂量计提供理论依据。
方法:
1.常规密度梯度法分离健康雌雄Wistar大鼠外周血淋巴细胞,与大鼠对应编号后,采用clinac23 EX医用直线加速器在相同条件下以0 Gy、0.5 Gy、0.75 Gy、1.0 Gy、2.0 Gy、3.0 Gy不同剂量的X射线均匀照射,即进行整体和离体照射。照后立即以同样方法分离淋巴细胞,PHA、ConA、IL-2协同刺激体外培养7天,用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术测试TCR基因突变频率。
2.应用SPSS17.0 for Windows统计软件包分析TCR.基因突变频率与照射剂量之间的关系。
结果:
1.本实验结果显示,0 Gy-3 Gy剂量范围内,离体照射大鼠外周血淋巴细胞TCR基因突变频率随照射剂量的增加而增加,照射剂量为O Gy时TCR基因突变频率平均为2.680x10-4,当剂量增加到3 Gy时,TCR基因突变频率可达到46.646×10-4。经Bivariate相关分析,照射剂量与TCR基因突变频率呈良好的正相关性,Pearson相关系数r=0.927。利用SPSS17.0统计学软件拟合剂量-效应曲线,最佳数学模型为二次多项式:TCRMf=1.615+9.979D+1.712D2(F=146.781,P<0.01,校正的拟合指数R2adj=0.864)。
2.大鼠接受不同剂量的X射线全身均匀急性照射后,外周血淋巴细胞TCR基因突变频率呈剂量依赖性增加,当照射剂量达到3 Gy时,TCR基因突变频率可增高到47.815×10-4,为对照组的17.84倍。TCR基因突变频率与照射剂量间相关关系良好,Pearson相关系数r=0.925。利用统计软件拟合剂量-效应曲线,最佳数学模型为幂函数:TCRMf=12.423D1.23(F=251.648,P<0.01,校正的拟合指数R2adj=0.867)。
35个剂量组内部的整体和离体照射诱发的TCR基因突变频率经统计学t检验分析,结果显示:全身均匀照射和照射离体外周血所致的TCR基因突变频率之间的差别无统计学意义(P>0.05)。
结论:
1.X射线整体和离体照射诱发大鼠淋巴细胞TCR基因突变频率都呈剂量依赖性增加,剂量-效应相关关系良好。
2.整体和离体照射所致大鼠淋巴细胞TCR基因突变频率之间的差别无统计学意义,表明检测离体外周血TCR可客观准确的反映整体照射的损伤情况。
3.本项实验结果为用离体照射人血建立的TCR基因突变剂量.效应曲线估算生物剂量提供了理论依据。