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结直肠癌是临床常见恶性肿瘤之一,对人类健康和生命构成极大威胁,寻找与结直肠癌发生发展密切相关的分子标志物、并对其进行相关的功能研究,是当前的主要研究方向之一。本实验室在前期工作中通过比较基因组改变的频率分布图,发现7p、8q和18q在结直肠癌组织和癌旁手术切缘组织之间存在最显著频率差异。根据前期工作中对100余对例结直肠癌组织和和癌旁组织Array CGH芯片分析的结果,并结合相关文献报道,本研究对150余个蛋白在近500例结直肠癌组织中的表达变化进行了免疫组织化学分析,发现15个蛋白在结直肠癌中高表达、而在正常组织中不表达或很低表达的蛋白,其中6个为首次显示在结直肠癌组织中存在异常。目前获得的最优蛋白组合检测结直肠癌的敏感性为85.7%,以病理学正常的手术切端组织作为对照,其“特异性”为100%。在上述研究的基础上,我们深入分析了DNAJB6.KIAA1522和DNAJB1蛋白在结直肠癌中表达的阳性率及其过表达与各临床病理参数之间的相关性。分析结果显示,与癌旁病理学正常的结直肠腺上皮相比,DNAJB6.KIAA1522和DNAJB1分别在53.3%(112/210)、50.7%(118/197)和50.7%(58/126)的结直肠癌组织中表达明显升高。生存分析的结果显示,DNAJB1(P=0.04).DNAJB6(P=0.002)和KIAA1522(p=0.008)高表达患者的无瘤生存时间均显著短于低表达或阴性表达的患者。Cox多因素回归分析的结果显示,KIAA1522(P=0.049)和DNAJB6(P=0.001)蛋白的过表达在结直肠癌中是独立的预后因子。为了探讨DNAJB6在结直肠癌发生发展过程中的具体作用机制,我们检测了其在多个结直肠癌细胞系的表达情况,并选择DNAJB6蛋白高表达的HCT-116和DLD-1细胞系进行siRNA敲降试验。研究发现下调DNAJB6可以显著抑制DLD-1和HCT-116细胞的侵袭,增强DLD-1和HCT-116细胞与基底胶的粘附能力,但对于细胞周期和增殖的影响并不显著。在分子水平,DNAJB6蛋白被敲降后,mTOR-S6K-S6信号通路中的关键分子S6K和S6蛋白的活化受到了抑制,但是该通路的重要负反馈调节因子PTEN蛋白的水平无显著变化。在结直肠癌组织中,DNAJB6蛋白的高表达和p-S6蛋白的高表达具有显著正相关性(P=0.025),提示DNAJB6在结直肠癌发生发展过程中,可能通过mTOR-S6K-S6信号通路发挥作用。同时,我们发现下调DNAJB6后,p-ERK蛋白水平下降,表明MEK-ERK可能是DNAJB6下游的信号通路。以上结果说明,在结直肠癌中高表达的蛋白组合其检测的敏感性较高,DNAJB1、DNAJB6和KIAA1522高表达的结直肠癌患者预后较差,DNAJB6和KIAA1522蛋白可能作为独立的预后因子.DNAJB6在结直肠癌发生发展过程中,可能是通过mTOR-S6K-S6和MEK-ERK增强细胞的运动和侵袭能力而发挥作用。