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目的:胃癌是严重威胁我国人们健康与生命的常见的恶性肿瘤之一。为阐明其发生发展机制,课题组前期筛选出胃癌组织高表达差异蛋白质RTN4,进一步了解其在胃癌发病过程中的作用与机制,可为揭示胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法:1、采用PCR方法构建p IRESneo3-RTN4真核表达载体,利用脂质体转染法将p IRESneo3-RTN4真核表达载体,转染永生化胃粘膜上皮GES1细胞,500mg/L G418筛选2周后汇合克隆,扩大培养,建立RTN4高表达GES1细胞系,即GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞;2、通过细胞免疫荧光和Western-blot检测GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞中RTN4的表达;3、运用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪等,观察RTN4高表达对GES1细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响。4、采用Western-blot检测GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞中IκBα蛋白的表达。结果:1、细胞生长曲线结果显示:GES1-RTN4细胞的生长速度较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显加快,说明RTN4高表达后促进GES1细胞的生长与增殖(P<0.01);2、平皿克隆形成实验结果显示:GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的克隆数分别为56±8、65±12和128±21(个),GES1-RTN4细胞形成克隆数目较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显增多(P<0.01),且克隆体积大,说明RTN4高表达后,GES1细胞的克隆形成能力明显增加;3、软琼脂集落形成实验结果显示:GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的集落数分别为64±12、72±16和146±28(个),GES1-RTN4细胞形成的集落较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显增多(P<0.01),且集落体积大,说明RTN4高表达后GES1细胞的集落形成能力明显增加;4、流式细胞仪检测结果显示:GES1细胞S期细胞比为45.63±4.62,G1期细胞比为49.57±8.49,细胞增殖指数为50.43;GES1-p IRESneo3细胞S期细胞比为30.10±6.28,G1期细胞比为48.75±7.86,细胞增殖指数为51.25;GES1-RTN4细胞S期细胞比为55.28±9.15,G1期细胞比为26.88±3.42,细胞的增殖指数为73.13。说明RTN4高表达后GES1细胞中S期细胞比例明显增加,G1细胞比例降低,细胞增殖指数增加(P<0.01);同时,GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的凋亡率降分别为24.65±4.58、24.43±3.36和17.52±1.23,说明RTN4高表达后,细胞的凋亡率降低(P<0.01)。5、Western-blot结果显示:GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白表达较GES1和GES1-p IRESneo3细胞减少(P<0.01)。结论:RTN4通过活化NF-κB信号通路,提高细胞增殖指数,抑制细胞凋亡,促进GES1细胞的增殖。