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背景：乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，乳腺癌的转移是影响患者疗效和预后并导致死亡的重要因素。肿瘤的侵袭转移是一个多步骤的复杂的、有序的过程，具有器官选择性的。与造血干细胞及淋巴细胞“归巢”类似，趋化因子在肿瘤嗜器官转移中起了重要作用。研究表明在乳腺癌高转移的器官组织中异常高表达CCL5，而乳腺癌组织高表达CCL5的受体CCR5，且与乳腺癌的恶性程度和病程相关，由此推测CCL5通过与乳腺癌细胞上相应的受体CCR5相结合而促进乳腺癌的转移。Ezrin为膜-细胞骨架连接蛋白，是ERM(Ezrin-radixin-moesin,merlin)家族成员之一，在多种恶性肿瘤中，Ezrin高表达与肿瘤发生发展及浸润转移有关，其通过改变肿瘤细胞运动、调节细胞间黏附、参与肿瘤细胞内信号转导、抑制细胞凋亡和调理吞噬细胞的吞噬功能等方面，影响恶性肿瘤的转移。本课题将研究趋化因子CCL5及其受体CCR5介导人乳腺癌细胞MCF-7的趋化与侵袭，并分析Ezrin蛋白在此过程中的重要作用及其机制。方法：1．选取人乳腺癌细胞系MCF-7作为研究材料，趋化小室检测不同浓度(0．1～100ng／ml)CCL5的作用下MCF-7细胞的侵袭活性；Western blot检测MCF-7细胞中总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化；RT-PCR法测定MCF-7细胞中趋化因子CCL5受体CCR5的表达。2．采用小干扰RNA方法下调Ezrin的表达，分别通过RT-PCR法和Western blot检测siRNA对Ezrin mRNA和蛋白表达水平的下调。干扰后，再采用趋化小室检测不同浓度CCL5的作用下MCF-7细胞的侵袭活性；Western blot检测MCF-7细胞中总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白表达随CCL5趋化时间的变化。结果：1．不同浓度CCL5促进MCF-7细胞侵袭能力不同，在20ng/ml CCL5作用下，MCF-7细胞表现出侵袭活性最强，浓度过高或过低均会影响侵袭活性；在20ng/mlCCL5作用下，总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白的表达随侵袭时间的延长而明显增加；人乳腺癌细胞MCF-7表达CCL5的受体CCR5 mRNA。2．成功构建Ezrin特异的RNA干扰质粒载体，与MCF-7细胞和转染空白质粒pSUPER细胞相比，转染pSUPER-Ezrin表达载体的MCF-7细胞Ezrin mRNA和蛋白的表达明显降低。干扰后，在50ng/ml CCL5作用下，MCF-7细胞表现出侵袭活性最强，但侵袭能力均较干扰前及对照组明显下降。在20ng/ml CCL5作用下，总的Ezrin蛋白及磷酸化的Ezrin蛋白的表达随侵袭时间的延长而增加微量。结论：趋化因子CCL5促进人乳腺癌细胞MCF-7的趋化与侵袭，Ezrin蛋白的激活在此过程中起着重要的作用；成功构建Ezrin特异性siRNA表达载体，可用于探讨乳腺癌的侵袭转移机制，并为有效地抑制肿瘤的转移提供新的生物治疗靶点。