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目的:构建具有高转染效率的慢病毒载体,探讨慢病毒介导的siRNA对乳腺癌MCF-7细胞中巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)的下调作用并建立稳定低表达MIF因子的乳腺癌细胞株。研究乳腺癌细胞中MIF因子的表达对血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)分泌的影响及作用机制。方法:1、构建携带干扰MIF表达的siRNA的慢病毒载体,转染乳腺癌MCF-7细胞,应用倒置荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞荧光表达情况及细胞状态。2、应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与免疫印记杂交技术(Western bolt)检测siRNA干扰后MCF-7细胞MIF因子mRNA及蛋白表达变化。3、应用RT-qPCR技术及酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下调MIF因子后,MCF-7细胞VEGF-C的mRNA表达变化及细胞培养上清中VEGF-C分泌情况。4、应用Western blot检测MIF因子沉默前后,MAPK信号通路中p38、P-p38、p44/42、P-p44/42的蛋白表达变化。结果:构建的携带siRNA的慢病毒载体对人乳腺癌MCF-7细胞转染效率超过80%,慢病毒转染细胞72小时后细胞内荧光表达量达到最高水平并趋于稳定。所构建的慢病毒携带的si RNA能有效阻断乳腺癌MCF-7细胞中MIF因子mRNA和蛋白的表达。MIF表达降低的乳腺癌细胞中,VEGF-C的mRNA表达水平及细胞外分泌蛋白水平相应降低。应用Western blot检测稳定低表达MIF的乳腺癌MCF-7细胞,结果显示,MAPK信号通路中的p38、P-p38、p44/42、P-p44/42表达水平均有不同程度的降低。结论:构建的慢病毒载体转染效率高,其所携带的siRNA能有效阻断MIF因子mRNA及蛋白的表达。MIF可以促进乳腺癌细胞VEGF-C的表达及细胞外分泌,其调控机制可能依赖于MAPK信号通路。