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目的探究鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠的体内外抗肺癌活性及其诱导A549细胞凋亡的相关机制。同时改善鱼腥草挥发油易挥发,生物利用度低的不足之处,制备包封率符合要求,长效缓释的PEG修饰鱼腥草挥发油脂质体。方法本研究首先采用MTT法检测鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠对A549细胞的增殖抑制率。采用FITC-AnnerxinV/PI双染法检测新鱼腥草素钠对A549细胞凋亡的影响,PI单染检测新鱼腥草素钠对A549细胞周期分布的影响。急性毒性试验初步考察鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠的毒性,确定给药浓度,进行裸鼠皮下荷瘤实验。分别采用鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠干预A549细胞,提取收集总RNA和蛋白质。以GAPDH为内参,采用实时荧光定量PCR法检测相关基因的表达量和蛋白质印迹法检测相关蛋白质的表达量。薄膜分散法制备PEG修饰鱼腥草挥发油脂质体,以蛋黄卵磷脂/挥发油、蛋黄卵磷脂/胆固醇和PEG2000-DSPE质量分数为主要因素,包封率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化制备工艺。考察制剂的外观形貌、粒径、电位、PDI大小,并进行稳定性因素试验。建立气相色谱法检测大鼠血浆中鱼腥草挥发油的含量,并进行方法学考察。大鼠眼眶取血,离心收集含药血浆,气相色谱检测药物浓度。绘制药时曲线,用DAS 3.0软件分析相关药动学参数。结果MTT检测结果显示,鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠均可抑制A549细胞的增殖,且具有明显的浓度和时间依赖性。新鱼腥草素钠抑制A549细胞的增殖主要以早期凋亡为主,随着药物浓度的增加,晚期凋亡率稍有增加,总凋亡率呈现上升趋势,各组之间具有统计学意义(P<0.05)。新鱼腥草素钠给药之后,与阴性对照组相比,G0/G1期的细胞数目增加,S期的细胞数目减少,G2/M期的细胞数目基本保持不变(P<0.05)。急性毒性试验得出鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠的LD50值分别为1904 mg/kg和197 mg/kg。荷瘤小鼠体内实验鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠的给药剂量分别为250 mg/kg、200 mg/kg、150 mg/kg;40 mg/kg、30 mg/kg、20 mg/kg。结果显示顺铂的抑瘤率为61.97%,鱼腥草挥发油的抑瘤率最大达到65.41%,新鱼腥草素钠的抑瘤率最大达到62.62%,抑瘤率均呈现浓度依赖性。与生理盐水组相比较,鱼腥草挥发油组和新鱼腥草素钠组均对荷瘤小鼠的抑瘤率具有显著性差异(P<0.05)。病理切片结果显示,鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠对A549小鼠移植瘤的生长有一定的抑制作用,且存在一定的剂量依赖性,对其他脏器的毒副作用不明显。本文使用鱼腥草挥发油干预后,以GAPDH为内参基因,对RAF/MEK/ERK-Bcl-2 信号通路的 6 种基因:RAF-1、MEK-1、MEK-2、ERK-1、ERK-2 和 Bcl-2表达水平的变化进行检测。结果显示,鱼腥草挥发油对RAF-1、MEK-1、ERK-1和Bcl-2四种基因的表达量有影响,对MEK-2和ERK-2无太大影响。随着给药浓度的增加,四种基因的表达量均呈不同程度的下降趋势,并与阴性对照组有显著性差异(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,鱼腥草挥发油对RAF-1、MEK1/2和ERK 1/2的蛋白表达无明显影响,但磷酸化蛋白表达水平显著降低,Bcl-2的相对蛋白表达量也呈下降趋势。随着鱼腥草挥发油浓度的增加,P-RAF1、P-MEK1/2、P-ERK 1/2和Bcl-2的表达量逐渐降低,并与阴性对照组有显著性差异(P<0.05)。使用新鱼腥草素钠干预,以GAPDH为内参基因,对相关通路的TNF-α和NF-κB表达水平的变化进行检测。结果显示,新鱼腥草素钠对TNF-α和NF-κB基因的表达量有影响。随着给药浓度的增加,两种基因的表达量均呈不同程度的下降趋势,并与阴性对照组有显著性差异(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,IKKα的相对蛋白表达量未受到明显影响,但其磷酸化蛋白表达水平显著降低,NF-κB p65蛋白及其磷酸化水平也呈下降趋势。随着新鱼腥草素钠浓度的增加,P-IKKα、P-NF-κB p65和NF-κB p65的表达量逐渐降低,并与阴性对照组有显著性差异(P<0.05)。制备PEG修饰鱼腥草挥发油脂质体的最优处方:蛋黄卵磷脂/挥发油为4.6:1、蛋黄卵磷脂/胆固醇为3.6:1、PEG2000-DSPE的质量分数为2%。制备所得脂质体包封率和载药量分别为80.42±0.12%和8.35±0.01%。平均粒径为114.43±1.39 nm,PDI为0.27±0.01,Zeta电位为-25.8±0.25 mV。释放度实验显示该脂质体具有一定缓释作用。气相色谱法检测大鼠血浆中鱼腥草挥发油的含量,该方法精密度好、误差小,结果稳定可靠。标准曲线为Y=0.061X+0.0672,R2=0.9992,在线性范围0.15μg/mL～149.70 μg/mL内线性关系良好。鱼腥草挥发油制备成PEG修饰脂质体后,其半衰期T1/2延长1.69倍,消除率CL/F下降1.56倍,曲线下面积AUC增大1.89倍。结论鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠体外对A549细胞均有抑制作用,且具有时间和浓度依赖性。鱼腥草挥发油和新鱼腥草素钠均可抑制肿瘤组织的生长,最大抑制率可分别达到65.41%和62.62%。其中鱼腥草挥发油是通过抑制RAF/MEK/ERK通路,抑制相关基因的表达和蛋白质的磷酸化水平,进而下调Bcl-2的表达,诱导A549细胞凋亡。而新鱼腥草素钠可能是通过抑制NF-κB通路相关基因的表达和蛋白质的磷酸化水平进而诱导A549细胞凋亡。制备所得PEG修饰鱼腥草挥发油脂质体包封率符合要求,4℃避光条件下放置。与鱼腥草挥发油相比,制成PEG修饰脂质体后半衰期长,体内的清除速率减慢,生物利用度高,具有长效缓释的作用。