转Bt基因植物花粉对意大利蜜蜂影响的研究

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:tanli357
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目前国际上纷纷开展了转抗虫基因植物花粉对非靶标昆虫特别是对有益昆虫如蜜蜂、瓢虫、草蛉等影响的研究,但多针对昆虫发育和行为研究,针对影响机理研究尚不多见。本试验通过饲喂意大利蜜蜂幼虫转Bt-Cry1Ab玉米、Bt-Cry1Ac棉花花粉,观察幼虫的生长发育情况,测定体内一些解毒酶、蛋白酶活性变化,并分离了意蜂、棉铃虫中肠BBMV(Brush Border Membrance Vesicles),进行结合动力学研究,主要结果如下:取食Bt花粉的蜜蜂与取食非Bt花粉的意蜂相比,幼虫和蛹的发育历期差异没有达到显著水平,其4日龄、5日龄和6日龄幼虫的体重也没有明显差别。体内酶活性方面,取食Bt玉米、棉花花粉蜜蜂6日龄幼虫体内谷胱甘肽-S-转移酶活性、总蛋白酶活性处理组和对照组差异不显著。而α-乙酸萘酯酶、乙酰胆碱酯酶、强、弱碱性类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性,处理组和对照组均有明显差异。通过Elisa方法检测,发现取食Bt玉米花粉的蜜蜂6日龄幼虫体内能够检测Cry1Ab杀虫蛋白,取食Bt棉花花粉的蜜蜂6日龄幼虫体内能够检测Cry1Ac杀虫蛋白。利用差速离心法,分离了意蜂、敏感品系棉铃虫BBMV。通过SDS-PAGE电泳发现:在53kDa~116kDa之间,意蜂存在5条比较明显的条带,其大小约为50、55、65、70、100kDa;而棉铃虫在这区间内只在68kDa处有一条比较明显的条带。在116kDa~212kDa之间,可以发现意蜂在130、160、180kDa处有三条蛋白条带;而棉铃虫在116kDa~170kDa之间存在多条连续的蛋白条带,在210kDa处有一条比较明显的条带。利用125I标记二种Bt蛋白(Cry1Ac、Cry2Ab),分别与意蜂、棉铃虫中肠BBMV进行体外标记结合试验。结果显示:蜜蜂与Cry1Ac的亲和性常数Kd值高于棉铃虫(约为5倍),说明意蜂与Cry1Ac亲和力低于棉铃虫,且其结合位点浓度Rt值低于棉铃虫(>2倍);意蜂与Cry2Ab的亲和性常数Kd值远高于棉铃虫品系(约为18倍),说明意蜂与Cry2Ab的亲和力远低于棉铃虫,但是二者的结合位点浓度Rt值相差不大。以上研究表明,取食转Bt基因植物花粉的意蜂幼虫,能够引起其体内某些酶活性的变化,但并未对其生长发育产生不利影响。同时结合动力学实验表明,Bt毒素与意蜂幼虫中肠BBMV的结合能力很弱,因此可以说转Bt基因植物对意大利蜜蜂无不利影响。
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