【摘 要】
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在纳米粒子的生物安全性问题中,一个非常基础且关键的问题是正确认识纳米粒子进入细胞的规律,以及与细胞相互作用的机制。本论文以量子点-一种具有广泛生物医学应用价值的荧光纳
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在纳米粒子的生物安全性问题中,一个非常基础且关键的问题是正确认识纳米粒子进入细胞的规律,以及与细胞相互作用的机制。本论文以量子点-一种具有广泛生物医学应用价值的荧光纳米粒子和在血管中对外界异物起第一防御作用的血管内皮细胞为主要研究对象,建立了量子点在活细胞内分布的三维实时显微观察技术和定量方法,通过研究经量子点作用后的细胞在形态学上的改变和细胞活性检测,获得进入细胞的量子点的量与其引起细胞毒性的对应关系。研究结果为进一步深入研究纳米粒子进入生物体的规律以及与生物体相互作用的机制提供了实验平台。
在探讨CdTe量子点在活细胞内分布的三维实时定量研究中,我们通过调节激光共聚焦荧光扫描显微镜的成像参数、量子点与人脐静脉内皮细胞共育的作用浓度、作用时间及培养条件,获得了成像的最优化的系统条件,并建立了量子点在人脐静脉内皮细胞内分布的三维实时定量方法。研究结果表明:在量子点浓度为0.005,0.01mg/ml和共育时间为2~48小时的条件下,细胞生长状态保持良好。量子点的作用浓度越高,则量子点进入细胞的荧光越强,量也越多,并且随作用时间增加而增加,在共育24小时后,细胞内的量子点都趋于平衡,并集中分布于近核周围。
在CdTe量子点对人脐静脉内皮细胞的毒性研究中,运用MTT比色法,结合Hoechst 33258染色实验,初步探讨了量子点对细胞活性的影响。实验结果显示水溶性CdTe量子点在μg/ml级已具有一定的细胞毒性;且量子点的作用浓度越大,与细胞共育的时间越长,则细胞的活性越小。结合上述的三维实时定量研究结果,得出量子点在细胞内的分布是剂量-时间相关性的,对细胞的毒性是时间-浓度依赖性的。
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