染发剂是人们最常使用的化妆品之一,氧化型染发剂由于具有染色效果好,色调范围宽,持续时间长等优点应用最为广泛。氧化型染发剂的有效成分是苯胺和苯酚衍生物,这些物质具有不同程度的致癌、致敏和遗传毒性,长期使用会对人体健康造成损害,所以必须对染发剂中染料的含量和种类加以限定。氧化型染发剂由于极性较强,挥发性较小,最适合用高效液相色谱法进行检测。《化妆品卫生规范》中规定了染发剂中93种暂时允许使用的染料和它们的限度。但是只有8种染料成分有相应的高效液相色谱检测方法,为了弥补数量上的不足,国家食品药品监督管理总局发布化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法,但实践表明该方法重现性、耐用性较差,灵敏度低。故本论文主要是对该方法进行重建,以适应染发剂检测的需要。酸性和碱性物质的分离一直都是反相高效液相色谱法的一个难点,酸性物质和碱性物质分离时在流动相中电离,电离后的组分亲水性急剧增强导致离子态组分在色谱柱中几乎不保留。组分在固定相和流动相发生分配平衡的同时其分子形式和离子形式发生电离平衡,流动相p H值微小的改变都会改变电离平衡的状态导致保留值的改变,解决这个问题的基本思路就是根据组分基团的pKa估算出分子完全呈分子态时流动相的pH范围,然后把该范围之间有一定交集的组分分成一组,如此就可以保证分子在分离时完全呈分子态,从而保证了耐用性和重现性。当苯胺等碱性物质呈分子态时通常溶剂也为碱性,而普通C18柱可以耐受的pH范围在2-6之间,所以需要选择特殊键合的反相色谱柱。此外还对缓冲盐种类、缓冲盐浓度、提取溶剂、检测波长等作了优化。建立了染发剂中32种染料含量的反相高效液相色谱测定方法。根据每个化合物的p Ka将32种物质分成3组,采用ZORBAX Extend C18(4.6 mm×250 mm,5μm)和ZORBAX Bonus-RP C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇、乙腈和pH分别为7.0,8.0和9.0的缓冲盐溶液作为流动相,流速为1.0 mL/min,使用二极管阵列检测器,检测波长分别为280,230和250 nm。在10-200mg/L的浓度范围内线性关系良好,各组分相对标准偏差均小于3%,在24h内的稳定性的相对标准偏差小于5%,在4,10,40 mg/L三个浓度水平下加标回收率为70%~130%。该方法操作简便,重复性、耐用性好,专属性强,可用于染发剂中染料含量的测定。