几种昆虫 病原真菌抗蚜虫活性分析及其功能蛋白的研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xuxu517
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本研究比较了6种昆虫病原真菌对桃蚜和大蜡螟的毒力,从白僵菌菌株Bb70分离纯化获得了毒蛋白Bb70p;克隆获得了白僵菌菌株Bb70的表皮降解蛋白酶(cuticle degrading protease)基因;主要研究结果如下:1)从白僵菌菌株Bb70分离纯化获得了一种新型的昆虫毒蛋白Bb70p,分子量为35.5kDa,PI4.5,对阴离子交换剂具有高亲和力,对疏水基(phenyl)交换剂没有亲和力;Bb70p在pH值4-10之间有活性,在4-60oC之间有活性,在37-40oC之间仍活性较高,然而在100oC时无活力。2)毒蛋白Bb70p可以激活PO级联反应。该毒蛋白具有大蜡螟注射活性。通过质谱分析获得该蛋白的部分肽段序列,通过NCBI (BLAST)数据库分析,其部分肽段序列与Clostridium sp.(bacteria)的3种假定性蛋白质有100%的同源性,与已报道的毒蛋白序列没有同源性,说明Bb70p是个从白僵菌菌株Bb70分离出来的新的毒蛋白。3)对6种昆虫病原真菌的发酵液和孢子进行致病性测试,证实发酵液比孢子喷雾导致的死亡率高一些。两种施用方法,蜡蚧轮枝菌V3菌株均表现出较高的毒性,白僵菌Bb70菌株和Bb76菌株的发酵液也显示较高的毒性。4)比较分析了6种昆虫病原真菌对大蜡螟的毒力。白僵菌菌株Bb252具有较高的毒性,在孢子喷雾或润湿剂条件下,Bb252的半数致死时间(LT50)分别为14.87和12.07天,19天之后,在190±30conidia/mm2和1x108conidia/ml浓度下的累积死亡率分别达到96.67和90.0%。同样,Bb252孢子注射的累计死亡率为96.67%(48小时后),在1x108conidia/ml浓度下的半数死亡率最低(LT50,10.2H)。在真菌发酵液和总蛋白注射下,蜡蚧轮枝菌V3菌株和V2菌株具有最高累计死亡率和较低LT50值。5)从白僵菌Bb70菌株克隆了一种表皮降解蛋白酶基因(1166bp)。NCBI (BLAST)数据库分析,该基因与已报道的表皮降解蛋白酶基因有98%的序列同源性。
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