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癫痫是神经系统第二大常见疾病,最突出的特点为发作的反复性、不可预知性和药物治疗的长期性。即使经系统规范化抗癫痫药物治疗,仍有接近1/3的患者癫痫发作未能得到有效控制,并最终进展成为难治性癫痫,给病人及家属带来了极大的痛苦,因此探索治愈癫痫的途径已成为神经病学领域的重要课题。目前癫痫的治疗药物主要靶向于控制发作症状,对慢性癫痫形成的病理生理过程难以发挥逆转作用,因此难以达到治愈癫痫的目的。这种情况下,探索新的针对癫痫发生的药物有可能为治愈癫痫带来希望。大量的动物实验和癫痫患者活检证据表明,星形胶质细胞的活化增生是癫痫发生中重要的病理改变。我们课题组前期研究发现:星形胶质细胞上的酸敏感离子通道1a(Acid Sensing Ion Channel 1a,ASIC1a)在癫痫慢性期中表达增多,这种变化可能和癫痫慢性期的病理进展有关,提示星形胶质细胞上的ASIC1a可能参与癫痫发生的病理过程,并可能成为新的癫痫治疗靶点。目的研究星形胶质细胞上ASIC1a在小鼠颞叶癫痫发生中的作用。方法分别构建携带有星形胶质细胞特异性启动子GFAP的Asic1a基因sh-RNA及ORF(open reading frame)的重组腺相关病毒(recombined adeno-associated virus,r AAV)载体(r AAV-GFAP-GFP-ASIC1a-sh RNA,r AAV-GFAP-ASIC1a-GFP),经过立体定向注射感染海马星形胶质细胞,敲低野生(WT)型小鼠海马星形胶质细胞上ASIC1a的表达,以及恢复Asic1a基因敲除(KO)小鼠海马星形胶质细胞上ASIC1a的表达。使用雄性8周龄C57遗传背景的WT和Asic1a基因敲除型KO小鼠,采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射建立小鼠颞叶癫痫发生模型,在小鼠氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱导癫痫持续状态后3-5天进行病毒载体立体定向注射和电极安装,观察小鼠癫痫持续状态发作后12-19天和5-6周4组实验小鼠:WT干扰组(下调ASIC1a表达)、WT对照组、KO型表达重建组(恢复ASIC1a表达)和KO型对照组脑电图发作和行为发作变化,结合免疫荧光染色方法进行分析。结果1、小鼠海马经立体定向注射病毒后5周,超过90%的星形胶质细胞表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)。2、小鼠氯化锂-匹罗卡品腹腔注射后12-19天(慢性癫痫发生潜伏期),敲低WT小鼠海马星型胶质细胞ASIC1a表达以及恢复ASIC1a KO小鼠海马星形胶质细胞上ASIC1a的表达对小鼠行为学发作以及EEG癫痫样放电无明显影响。各组间潜伏期内发作次数、发作程度Racine评分和平均自发发作持续时间均无统计学差异(P>0.05)。WT干扰组和WT对照组脑电功率值无统计学差异(P>0.05);KO型表达重建组和KO型对照组脑电功率值无统计学差异(P>0.05);KO型表达重建组脑电功率值与WT型干扰组之间无统计学差异(P>0.05)。3、小鼠氯化锂-匹罗卡品腹腔注射后5-6周(慢性癫痫发生期),WT鼠海马星型胶质细胞ASIC1a敲低组慢性自发性癫痫发作次数以及发作间期EEG放电强度明显低于相应对照组(P<0.05)。KO小鼠海马星形胶质细胞上ASIC1a表达重建组慢性自发性发作次数以及发作间期EEG放电强度较相应对照组明显增多(P<0.05)。各组间行为发作等级和平均每次自发发作时间均无统计学差异(P>0.05)。结论在小鼠颞叶癫痫发生模型中,特异性抑制星形胶质细胞上ASIC1a能够明显减少小鼠慢性自发性发作次数,并减轻脑电图发作强度,提示星形胶质细胞上的ASIC1a可能为癫痫发生治疗的新靶点。