【摘 要】
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目的:研究脑缺血预处理对再次脑缺血的神经功能、细胞形态、线粒体通透性转换(mitochondrial permeability transition,MPT)及细胞色素C(cytochrome c,CytC)水平的影响,进一
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目的:研究脑缺血预处理对再次脑缺血的神经功能、细胞形态、线粒体通透性转换(mitochondrial permeability transition,MPT)及细胞色素C(cytochrome c,CytC)水平的影响,进一步探讨脑缺血预处理的脑保护机制。方法:48只雄性SD大鼠(体重230-300g)随机分成4组:假手术组(n=12)、单纯预处理组(n=12)、脑缺血组(n=12)、预处理后脑缺血组(n=12)。假手术组:颈部正中切口暴露右侧颈总动脉后缝合皮肤。单纯预处理组:按Longa线栓法略加改进制成局灶-局灶脑缺血模型,缺血30分钟,拔出线栓之后结扎颈外动脉残端。脑缺血组:线栓直接栓至右侧大脑中动脉,缺血时间为24小时。预处理后脑缺血组:预处理同单纯预处理组,术后饲养24h后在右侧颈总动脉剪一小口,经颈内动脉插入备好的线栓至右侧大脑前动脉,再缺血时间为24h小时。分别观察三组动物的以下指标:按Bederson6级5分法进行神经功能评价(每组12只);HE染色(每组12只);用免疫组织化学方法检测大鼠海马组织细胞色素C水平变化(每组12只);紫外分光光度法测定线粒体通透性转换(每组12只)。结果:(1)神经功能评分:假手术组、单纯预处理组、脑缺血组及预处理后脑缺血组神经功能评分为0,25±0.20,2.24±0.87、1.16±0.71,(n=12);假手术组与单纯预处理组比较无显著性差异(p>0.05),预处理后脑缺血组神经功能评分低于脑缺血组(p<0.05)。(2)假手术组、单纯预处理组、脑缺血组及预处理后脑缺血组海马CA1区组织切片镜下计数神经元细胞总数分别为167、161、124、138,各组的损伤神经元计数分别为13.22±4.21,13.2±7.4、90.07±10.51、61.41±8.64;假手术组与单纯预处理组海马CA1区计数神经元细胞总数及损伤数比较p>0.05,无统计学差异;预处理后脑缺血组与脑缺血组比较p<0.05,存在显著性差异。(3)细胞色素C水平测定:假手术组、单纯预处理组、脑缺血组及预处理后脑缺血组细胞色素C阳性细胞率(%)分别为10. 2±2.67, 12.5±3.9, 54.6±6.98、31.4±4.1;假手术组与单纯预处理组比较无显著性差异(p>0.05),预处理后脑缺血组细胞色素C阳性表达率低于脑缺血组(p<0.05)。(4)线粒体通透性转换检测:假手术组、单纯预处理组、脑缺血组、预处理后脑缺血组MPT的D540处OD值分别为0.568±0.083、0.547±0.098、0.298±0.077、0.427±0.113;假手术组与单纯预处理组比较无显著差别(p> 0.05),预处理后脑缺血组OD值高于脑缺血组(p<0.05)。结论:预处理后脑缺血组神经功能好于脑缺血组,细胞色素C阳性表达率低于脑缺血组, MPT的OD值高于脑缺血组,提示缺血预处理后的脑组织耐受性明显增强,对再次缺血产生脑保护作用。且MPT变化时CytC阳性表达增加,间接提示CytC从线粒体途径释放,脑缺血预处理可能是通过减轻线粒体通透性转换,从而减少CytC释放达到缺血耐受效应。
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