利用乳腺生物反应器生产生物活性蛋白,是当前生物领域研究的热点,制备乳腺生物反应器的关键在于构建合理、表达效率高、特异性好的真核表达载体,本实验中应用的酪蛋白是牛乳中一个主要的蛋白成分。该研究中,以牛酪蛋白基因的上游调控成分作为启动子,嗜热菌糖苷酶基因lacS为目的基因,构建了一个乳腺特异性表达载体,并利用脂质体介导重构载体转染奶牛乳腺上皮细胞和蒙古牛胎儿成纤维细胞,对转基因的奶牛乳腺上皮细胞做DNA、RNA及蛋白水平的鉴定。对转基因蒙古牛胎儿成纤维细胞做DNA水平鉴定。首先,通过PCR技术分别从不同模板上扩增出CMV启动子、poly（A）加尾序列、lacS基因序列、BC启动子等部分,依次将上述序列与pDsRed2-1质粒相连接,利用CMV启动子指导红色荧光蛋白基因表达,便于筛选阳性克隆;BC启动子指导目的基因lacS在奶牛乳腺进行特异性表达;从而构建乳腺特异性表达载体pBL。其次,利用脂质体介导重构载体转染奶牛乳腺上皮细胞,并从DNA、RNA及蛋白水平进行鉴定。培养蒙古牛胎儿成纤维细胞,做形态学分析,生长曲线测定、核型分析、性别鉴定及G418最小致死浓度测定。通过脂质体介导重构载体转染蒙古牛胎儿成纤维细胞,并做DNA鉴定,为后续核移植实验,生产转基因动物提供体细胞。结果表明:奶牛乳腺上皮细胞G418最小致死浓度为700μg/ml,在DNA、RNA及蛋白水平上能够检测到目的基因的表达。蒙古牛胎儿成纤维细胞G418最小致死浓度为700μg/ml。在DNA水平上能够检测到目的基因。综上所述,该表达载体的构建是成功的,能够在乳腺中特异性表达,可以为核移植提供细胞来源,进行后续实验。