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小儿多发性抽动症(TS)是一种儿童时期常见的神经精神疾病,以运动性抽动(motor tics)和(或)发生性抽动(vocal tics)为特征。随着其发病率的逐渐增高,以及对患儿的心智发育和人格塑造所产生的不良影响,受到学者们的极大关注。目前常用的多巴胺受体阻滞剂、中枢性α受体激动剂等治疗药物在服用后可能出现一系列锥体外系反应,使得患儿及家长难以接受,不能坚持治疗,导致病情反复,迁延难愈。在北京中医药大学中青年教师项目资助下,以TS为研究对象,进行了健脾止动汤安全性评价的临床研究,及脾虚证TS小鼠模型的基础研究。导师王素梅教授从小儿“脾常不足,肝常有余”的生理特点出发,以中医理论“扶土抑木,平衡阴阳”为治疗原则,临床应用自拟方健脾止动汤治疗脾虚肝亢证TS患儿,经临床实疗效显著。但由于TS的易复发及长时程性,临床用药时间往往较长,其安全性尚待系统评价。本课题探讨评价健脾止动汤应用12周的安全性,为其新药开发奠定临床应用基础。既往课题组对健脾止动汤治疗TS的神经生化学机制研究以亚氨基二丙腈(IDPN)腹腔注射诱导的TS模型鼠为基础,从皮质-纹状体-丘脑-皮质(CSTC)回路中的神经递质入手,探讨健脾止动汤对多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)等单胺类神经递质及Y-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)及其受体的影响。但在研究中发现,疾病动物模型难以全面客观体现证候特点、无法系统反映中医辨证论治特点等问题逐渐凸显。构建TS脾虚证病证结合动物模型是研究的必然趋势。第一部分：文献综述综述一中医动物模型建立的研究进展概述疾病动物模型、证候动物模型及病证结合动物模型等中医动物模型建立的研究进展。综述二小儿多发性抽动症的西医研究进展概述西医对TS的流行病学、病因、治疗等各方面的最新研究进展。第二部分：临床研究应用健脾止动汤治疗小儿多发性抽动症的安全性评价目的探讨健脾止动汤连续治疗脾虚肝亢证TS患儿12周的安全性。方法比较91例脾虚肝亢证TS患儿口服健脾止动汤12周前后肝功能(谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST)、肾功能(肌酐Cr、尿素氮BUN)、抗链"0" (ASO)的变化。结果1例患儿出现肝功能ALT、AST升高,91例患儿肾功能Cr、BUN在治疗后无升高,Cr在疗后降低者高达86例,占到94.5%。ASO在治疗后较治疗前升高人数明显下降。结论健脾止动汤治疗脾虚肝亢证TS 12周,无明显肝肾功能损害,有着较好的安全性,且一定程度上可控制链球菌感染,减少反复。第三部分：实验研究实验一 脾虚证多发性抽动症小鼠模型的建立及评价目的 探索建立脾虚证TS小鼠动物模型,初步了解该脾虚模型的一般特征,为进一步探索该模型的生物学特点及健脾止动汤更深层次的研究提供病证结合模型。方法 30只ICR雄性小鼠随机分为3组,每组10只,分别为空白组、模型组、脾虚组。除空白对照组外,其余2组小鼠腹腔注射IDPN,350mg·kg-1·d-1 (IDPN原液用生理盐水稀释50倍,17ml·kg-1·d-1),空白对照组腹腔注射等体积的生理盐水,每天1次,连续8天。从腹腔注射IDPN造模之日起,予脾虚组小鼠番泻叶颗粒剂溶液灌胃,20ml·kg-1·d-1(番泻叶颗粒剂温水溶解,1g·ml-1),连续8天。观察小鼠活动、形态、毛色、饮食、排便及腹形、体表被毛性状等变化。通过自主活动计数、刻板运动评分、体重、食量、大便粒数、胸腺及脾脏指数、胃泌素、D-木糖等指标对脾虚证TS小鼠进行评价。结果 模型组、脾虚组小鼠造模后在相同的时间内活动路程及平均速度较空白对照组明显增加,且2组之间刻板运动评分无统计学差异(P>0.05)。脾虚组、模型组小鼠体重增加缓慢,脾虚组更为明显,但各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。脾虚组小鼠的食量在同时间节点与空白组、模型组小鼠相比均有降低,尤以造模后第一周明显,但各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组小鼠在造模后大便颗粒数基本相等,随着时间的延长,从第14天起开始,脾虚组一只小鼠死亡,大便颗粒数仍呈较高幅度的增加。3组小鼠之间相比,胸腺指数、脾脏指数及胃泌素、D-木糖浓度均无统计学差异(P>0.05)。结论 ICR小鼠腹腔注射IDPN 350mg·kg-1·d-1所诱导的TS模型稳定,表面效度良好,可维持较长时间(至少1个月)。结合浓度为1 g/ml的番泻叶颗粒剂溶液20ml·kg-1·d-1灌胃,抽动症状稳定,具有脾虚证的某些症状,一定程度上具备了脾虚证TS的表面效度,但生物学特性与临床尚有差距。实验二 脾虚证多发性抽动症小鼠模型的比较目的 比较腹腔注射IDPN结合大黄、番泻叶灌胃所建立的两种脾虚证TS小鼠模型,选择较优的造模方法。方法 36只ICR雄性小鼠随机分为3组,每组12只,分别为对照组、大黄组、番泻叶组。3组小鼠腹腔注射IDPN,350mg·kg-1·d-1(IDPN原液用生理盐水稀释50倍,17ml·kg-1·d-1),连续8天。从腹腔注射IDPN造模之日起,大黄组小鼠予大黄颗粒剂溶液灌胃,50ml·kg-1·d-1(大黄颗粒剂温水溶解,1g·ml-1),连续8天。番泻叶组予番泻叶颗粒剂溶液灌胃,50ml·kg-1·d-1(番泻叶颗粒剂温水溶解,1g·ml-1),连续8天。观察小鼠活动、形态、毛色、饮食、排便及腹形、体表被毛性状等变化。通过刻板运动评分、胸腺及脾脏指数、胃泌素、D-木糖等指标进行评价。结果 大黄组、番泻叶组小鼠除抽动、旋转行为外,出现体重增加缓慢,食量下降,肛门轻微污秽,大便粒数增多等脾虚症状,具有脾虚证TS的表面效度。与模型组相比,大黄组小鼠脾脏指数、D-木糖浓度均明显降低,番泻叶组仅D-木糖降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论ICR小鼠腹腔注射IDPN 350mg·kg-1·d-1结合浓度为1g·ml-1的大黄颗粒剂溶液50ml·kg-1·d-1灌胃建立脾虚证TS模型一定程度上具备了脾虚证TS的表面效度及结构效度,且优于番泻叶颗粒剂溶液50ml·kg-1·d-1灌胃所致模型。