论文部分内容阅读
近年来,糖尿病（Diabetes mellitus,DM）发病率在全球范围内逐渐上升,其危害愈来愈引起人们的重视。糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病微血管常见并发症之一。其发病机制涉及多种因子。结缔组织生长因子（Connective tissue growth factor,CTGF）及血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）与肾脏病的关系已成为国际研究热点。CTGF在糖尿病肾病的发生发展中起重要作用。CTGF是转化生长因子β1,（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）的下游效应介质,但CTGF不介导TGF-β1的抗增殖和抗炎作用,而仅介导TGF-β1的促细胞基质合成作用。VEGF是内皮细胞的特异性有丝分裂源,促进内皮细胞增殖、新生血管形成,增加血管通透性,是导致DN早期微量蛋白尿的主要原因之一,并与其它因素一起参与肾小球硬化。 肾小管是连接肾小球与肾间质的枢纽。肾小管上皮细胞在肾间质纤维化的发生与进展中起何作用,值得进一步研究。 研究显示,中药黄芪有保护肾功能,减轻蛋白尿作用,但其确切机制仍未明了。目前尚未见黄芪对糖尿病大鼠CTGF及VEGF影响的报道,亦未见黄芪对体外培养肾小管上皮细胞转分化影响的研究。故本研究分体内与体外两部分。 目的:在体内,观察黄芪对2型糖尿病大鼠CTGF、VEGF的影响;探讨其机制;在体外,观察黄芪含药血清对肾小管上皮细胞CTGF、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）等的影响。 方法:（1）体内试验:采用一侧肾切除+高糖高脂饮食+链脲佐菌素法制备2型糖尿病大鼠模型。实验分为4组:①糖尿病组:建立DM模型;②黄芪组;③厄贝沙坦组;④假手术组。观察各组血糖、血胰岛素、血脂、肾重/体重、肾小球面积及体积、尿微量白蛋白等,免疫组化法观察VEGF、TGF-β1、CTGF、IV型胶原、纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）表达;RT-PCR法测肾皮质CTGFmRNA表达水平。（2）体外实验:体外培养肾小管上皮细胞（NRK-52E）。分为3组:①10%正常大鼠血清组;②10%正常大鼠血清+TGF-β1组;③10%含黄芪大鼠血清+TGF-β1组。作用48h后,观察NRK-52E形态变化,RT-PCR法观察CTGF mRNA基因表达;Western blot法观察CTGF及α-SMA蛋白表达,流式细胞仪检测α-SMA表达。 结果:（1）体内试验:糖尿病组大鼠血糖、血胰岛素、TC、TG、Ccr、尿微