粘虫102基因的克隆、表达及功能鉴定

来源 :山西师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:aji_y
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
粘虫Mythimna separata(Walker)(鳞翅目:夜蛾科)是我国粮食作物的重大害虫,其幼虫体色有随幼虫密度变化而产生的黑化或变型现象:如高密度和低密度诱导产生的黑色型和淡色型,以及处于这两者之间的中间(灰色)型等。不同型的幼虫不仅在生长发育特征,取食和消化生理上存在较大差异,而且其免疫体系如酚氧化酶和溶菌酶活性,以及抵御天敌寄生或病原物感染的能力也明显不同。另外,从不同型的幼虫羽化的成虫飞行和生殖能力也不一样。但是,这些差异的产生是否与基因有关或受到基因的调控目前尚没有报道。为此,本文在克隆得到了粘虫102基因的基础上,研究明确了102基因序列和时空表达规律,揭示了幼虫密度、寄生蝇寄生和绿僵菌感染对幼虫102基因表达的诱导作用,最后明确了其在幼虫免疫以及成虫飞行与生殖中的作用。所获的主要结果为:研究明确了粘虫102基因序列及其与其他鳞翅类昆虫的关系。根据粘虫转录组数据库扩增获得粘虫102基因的开放阅读框,命名为102基因(基因库登录号:MG844422)。其长度为1050 bp,P102蛋白编码349个氨基酸,起始和终止密码子分别为ATG和TAA,分子式为C1763H2778N468O525S15,预测蛋白分子量为39.411 kDa,理论等电点为5.81。序列分析结果表明,粘虫102基因与其他虫棉铃虫Helicoverpa armigera,烟蚜夜蛾Heliothis virescens,灰翅夜蛾Spodoptera littoralis和斜纹夜蛾Spodoptera litura等夜蛾昆虫的序列相似度超过90%,而与其他鳞翅类昆虫相似度在70%左右。系统进化树分析结果也与粘虫在传统分类学中的地位相吻合。研究明确了102基因的时空表达差异。利用qPCR技术对102基因相对表达量进行研究的结果表明,在mRNA水平上,102基因的时空表达差异显著:就发育阶段而言,虽然102基因在卵、1-6龄幼虫、预蛹和成虫中均可表达,但以6龄幼虫的表达量最高,之后依次为成虫、预蛹、5和4龄幼虫的。这5个虫态之间的表达量差异显著,且均显著高于卵和1-3龄幼虫的;在4-6龄幼虫、预蛹和成虫各类组织中,表达量均以脂肪体的最高,并显著高于表皮、头部、消化道和血淋巴的,而后4者之间的表达量差异不显著;在成虫中,102基因在飞行肌的表达虽然显著低于脂肪体的,但显著高于其他组织的。为此,粘虫102基因主要在6龄幼虫和脂肪体内表达。研究明确了幼虫密度、寄生蝇寄生和绿僵菌感染对102基因量诱导表达作用。1)对1、10和20头/瓶不同密度条件下4-6龄幼虫和预蛹的102基因在脂肪体及其他组织的相对表达量测定的结果表明,在脂肪体中,以10头/瓶的表达量最高,20头/瓶的次之,1头/瓶的最低,三者之间差异显著。其他组织的表达量也是以10头/瓶的最高,但会因虫龄或组织的不同而异;2)被伞裙追寄蝇寄生后,5-6龄幼虫102基因表达量显著升高:在被寄生幼虫脂肪体和血淋巴内的表达量比对照的增加了2倍多;3)被绿僵菌感染后的幼虫102基因表达量变化显著:与对照幼虫脂肪体内的表达量相比,10和20头/瓶条件下的表达量显著高于对照的,但1头/瓶的则低于对照的。这些结果表明,102基因在粘虫适应密度变化或抵御寄生物的入侵均具有重要作用。研究明确了102基因在幼虫免疫防御、成虫飞行和生殖中的作用。在研究确定了RNAi技术对幼虫以及初羽化成虫的102基因的沉默效果后,与各种对照相比发现:1)处理幼虫体内P102蛋白含量明显低于其他对照组的,经绿僵菌诱导后,P120蛋白含量依然低于对照的。另外,处理幼虫抗绿僵菌活性显著降低,即感染绿僵菌后死亡率升高;2)处理幼虫体内酚氧化酶(PO)活性显著下降,用绿僵菌诱导后的PO活性比对照的显著降低;3)处理成虫飞行距离、时间和速度均低于对照的,长距离(时间)飞行个体的比例也比对照的低。且RNAi干扰对成虫的产卵前期产生影响,但是对产卵历期和产卵量的影响均不显著。这些结果表明,102基因对于成虫的免疫防御和飞行能力的维持均具有重要作用。所获结果首次阐明了粘虫102基因的序列和结构特征,以及时空表达规律,揭示了102基因在粘虫免疫防御、适应密度变化以及飞行中的作用,为继续研究基因对粘虫免疫防御能力,以及迁飞行为机制的调控奠定了坚实的基础,并为揭示粘虫暴发成灾机制以及改善其预警防治技术提供了新的实验依据。
其他文献
青岛华林胶合板有限公司的全套工艺设备主要是由芬兰劳特公司提供的。因两台涂胶机生产能力不足,需要从国内再购买两台涂胶机。芬兰涂胶机设计比较先进,上胶辊组件在清洗时可
针对目前输电线路台帐系统的特点,结合最新Google Earth的高清卫图和KML语法,研究并开发了基于Google Earth的线路台帐表格生成系统。该系统可批量修改和生成含线路台帐资料的KML或KMZ文件,为线路管理提供了地图支持,并已成功应用于北海供电局的输电线路管理中,应用效果良好,具有推广应用价值。
回 回 产卜爹仇贱回——回 日E回。”。回祖 一回“。回干 肉果幻中 N_。NH lP7-ewwe--一”$ MN。W;- __._——————》 砧叫]们羽 制作:陈恬’#陈川个美食 Back to yield
会议
我是一个摩托车迷,也是一个正宗的《摩托车》迷,《摩托车》杂志我是每期必买。我在真正意义上拥有自己的摩托车,是2002年的8月,经过几天的筛选比较,从性价比出发,我最终还是选择了
分别采用不同品质的I类、II类和III类再生细骨料按照不同的取代率制备再生细骨料混凝土,通过试验重点研究再生细骨料的品质和取代率对不同水泥用量体系下混凝土工作性能和力
面瘫多因气血不足,营卫失调,腠理疏松,脉络空虚,以致风寒、风热之邪乘虚上犯头面、少阳、阳明脉络,气血运行滞涩,经筋肌肉失于濡养,弛纵不收而发病。《类证治裁》云:“口眼歪
目的观察探讨腹腔镜手术用于治疗胃肠肿瘤患者的临床效果与可行方法。方法回顾分析我院近一年(2015年5月-2016年5月)收治的胃肠肿瘤患者68例,根据临床治疗方案实施的不同,将6
用尿素对聚酰胺进行改性,并用环氧氯丙烷进行交联制得改性聚酰胺。研完了反应时间对产物表观粘度的影响。测定了产品表观粘度为900~1500mPa·s,pH值为6~8,固含量为(65±1)%,用
“YES! YAMAHA!”经过半年的精心筹备,2006年中国警察摩托车拉力赛将在金秋10月拉开令人期待的大幕!摩托车赛的主角自然是车手及其坐骑,英姿勃发的骑警们会驾驶着哪一品牌的摩
当前,我国的高等院校紧跟时代的发展步伐积极建设信息化校园,其中“校园一卡通”是我国高校在数字化校园建设方面的一个具有代表性的成果.文章首先对校园一卡通的功能进行了