钙网蛋白介导的凋亡在早期先兆流产过程中的作用研究

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目的:钙网蛋白(Calreticulin,CRT)是一种在结构和功能上具有高度保守性的Ca2+结合蛋白,近年来研究表明CRT的表达水平与生理妊娠和病理妊娠都密切相关。然而,目前对其作用机制仍不十分明确。本课题旨在通过对早期先兆流产绒毛和蜕膜组织中CRT表达水平的检测和体外实验中观察过表达与下调CRT时人胎盘绒毛膜癌细胞(BeWo)中Caspase-3的表达情况来探索其介导的凋亡与先兆流产的关系。  方法:(1)分别收集并处理早期正常妊娠及早期先兆流产患者人工流产后的绒毛和蜕膜组织;(2)免疫组织化学检测CRT蛋白的表达;Western blot检测CRT蛋白的表达;QPCR检测CRT mRNA的表达;(3)合成并检测质粒mEmerald-CRT的表达;(4)合成并检测si-CRT的表达;(5)分别转染质粒mEmerald-CRT与si-CRT至BeWo细胞中,检测CRT及Caspase-3的表达。  结果:(1)收集正常人流组(35例)与先兆流产组的病例标本(40例);(2)免疫组化可见阳性信号定位于发育不良的绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞的胞浆和胞膜上,先兆流产组染色比正常早孕组深,面积更大;Western blot检测CRT蛋白的表达量在先兆流产组高于正常人流组;QPCR检测CRT mRNA的表达量在先兆流产组高于正常人流组;(3)合成并检测质粒mEmerald-CRT的表达;(4)合成并检测si-CRT的表达;(5)成功转染质粒mEmerald-CRT至BeWo细胞中, QPCR检测CRT mRNA与Caspase-3 mRNA在质粒转染组高于对照组,P<0.05;Western blot检测CRT与Caspase-3蛋白表达量在质粒转染组高于对照组,P<0.05;(6)成功转染si-CRT至BeWo细胞中,QPCR检测CRT mRNA与Caspase-3 mRNA在si-CRT组低于对照组,P<0.05;Western blot检测CRT与Caspase-3蛋白表达量在si-CRT组低于阴性对照组,P<0.05。  结论:早期先兆流产的发生可能与内质网应激过度引起的CRT高表达有关;应激过度超过机体耐受则引起滋养层细胞及蜕膜的过度凋亡,进而胚胎难以继续发育引发先兆流产。
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