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膝骨关节炎(Knee Osteoarthritis,KOA)是最常见的骨与关节退行性疾病,因其发病机制一直未能明确,至今没有特效的治疗药物。KOA疼痛症状的出现很早,影响也最深远。KOA疼痛对冷温刺激非常敏感,近年来研究逐步揭示这是一类冷刺激痛敏。TRPA1和TRPM8是人体对低温刺激所致疼痛信号转递的介导者,膝骨关节炎中是否存在TRPA1、TRPM8的参与,对于认识KOA疼痛和开发靶向药物意义重大。"易层"贴敷膏剂是我院专利成方,以"温经活血"立法,通过"截断" KOA疼痛,"扭转" KOA病情进展,具有良好的效果,其药效机制是否与此有关,也是我们本课题研究的关注点。目的:探索TRPA1和TRPM8与KOA冷刺激痛敏之间的联系,以及温经活血外治("易层"贴敷膏剂)通过截断KOA冷痛敏扭转其病情进展的疗效机制。方法:1.对比KOA的人滑膜组织(全膝关节置换手术术中提取废弃滑膜)和非KOA的人滑膜组织(半月板损伤关节镜清理修补手术中所获滑膜碎屑)中TRPA1和TRPM8的蛋白和mRNA含量;2.对比KOA大鼠模型冷刺激痛阈、滑膜组织TRPA1和TRPM8的蛋白和mRNA含量变化,以及选择性TRPA1、TRPM8阻断剂对冷痛阈的影响和滑膜细胞TRPA1、TRPM8电生理特性的改变。3.观察"易层"贴敷膏剂对KOA大鼠模型冷刺激痛阈、滑膜组织TRPA1和TRPM8蛋白和mRNA含量的影响。4.TRPA1和TRPM8活化的维持尚受到炎性细胞因子的调节,进一步观察"易层"贴敷膏剂对KOA炎性细胞因子含量的影响。结果:1.KOA的人滑膜组织对比非KOA的人滑膜组织,TRPA1、TRPM8的蛋白和mRNA含量水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);2.KOA大鼠对比空白对照组健康大鼠冷刺激痛阈显著下降,TRPA1、TRPM8的蛋白和mRNA含量水平显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);选择性TRPA1、TRPM8阻断剂通过阻断滑膜细胞上TRPA1、TRPM8的钙离子内流,能够上调KOA大鼠的冷刺激痛阈,差异有统计学意义(P<0.05);3."易层"贴敷膏剂能够上调KOA大鼠模型冷刺激痛阈,下调KOA大鼠滑膜组织中TRPA1和TRPM8蛋白和mRNA含量,差异有统计学意义(P<0.05);4."易层"贴敷膏剂能够下调KOA大鼠促炎细胞因子含量水平,上调抑炎细胞因子含量水平,这与其能够抑制TRPA1、TRPM8的通道活化有关。结论:TRPA1和TRPM8是KOA冷刺激痛敏的重要介导者,"易层"贴敷膏剂可能通过下调TRPA1、TRPM8表达和抑制TRPA1、TRPM8通道活性,缓解KOA冷刺激痛敏,发挥其疗效。"温经活血、截断扭转"作为KOA治疗理论有其临床价值。