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目的：利用流式细胞仪（FCM）检测RNA干扰技术沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期状况和细胞凋亡水平变化，探讨（1）STAT3基因表达在肺腺癌A549细胞增殖生长中的作用；（2）STAT3是否介导A549细胞周期的进展；（3）STAT3与A549细胞的凋亡是否有密切关系。
方法：（1）STAT3siRNA的构建和转染：①从CNKI上搜索人的STAT3mRNA全基因序列，将搜索的所有序列利用BLAST软件进行同源性分析。②将比对好的STAT3mRNA全基因序列作为模版，从基因编码区起始密码子下游寻找符合设计特征的靶序列，根据siRNA的设计原则，设计三段表达STAT3特异shRNA的基因序列。⑧按照设计的序列，采用化学合成的方法合成三条双链siRNA，分别为STAT3siRNA-1、STAT3siRNA-2、STAT3 siRNA-3，同时设立Non-Control阴性对照组，Non-Control-FAM荧光对照组及空白组。④采用脂质体介导方法将siRNA转染A549细胞，并利用荧光显微镜观察转染情况，估计转染效率，筛选最佳转染浓度。（2）AM-BLUE法测定RNA干扰的抑制率：于转染24h、48h、72h分别加入AM-BLUE孵育4-6h，用酶联免疫检测仪检测光吸收值，计算出抑制率。（3）FCM检测STAT3基因沉默前后肺腺癌A549细胞的细胞周期状况和细胞凋亡水平：①于转染24h、48h、72h收集细胞，将细胞固定后，进行PI染色，利用FCM检测细胞周期的变化。②于转染24h、48h、72h收集细胞，利用AnnexinⅤ联合PI法检测细胞的凋亡。
结果：（1）成功设计并化学合成siRNA，成功转染A549细胞，并根据转染效率筛选出最佳转染浓度；（2）AM-BLUE法检测结果显示RNA干扰的抑制率于转染后24h即可出现，48h抑制率较24h有明显上升（P<0.05），72h的抑制率较48h上升不显著（P>0.05）。表明48h后抑制率进入稳定阶段。对应不同靶点的三条STAT3siRNA均可抑制A549细胞增殖，且三者抑制率差别不显著（P>0.05）；（3）利用FCM检测到STAT3siRNA肺腺癌A549细胞大量处于G0/G1期，而S，G2/M期的细胞相对减少。提示细胞未能进入S期完成DNA的合成，无法进入分裂期，细胞周期被阻断。（4）利用FCM检测RNA干扰后A549细胞凋亡明显增多，前48h增幅明显（P<0.05），48h后增幅趋于平稳（P>0.05），但仍能较长时间维持较高水平，干扰各组A549细胞凋亡率无明显差异（P>0.05）。
结论：（1）本实验利用基因重组技术，针对STAT3基因编码区，成功合成发夹状小干扰RNA（siRNA），并将其成功转染入真核细胞中；（2）利用AM-BLUE法检测siRNA干扰前后A549细胞的增殖生长，说明siRNA能有效地抑制A549细胞的增殖生长，STAT3作为治疗肺癌的靶点是可行的，我们选择沉默STAT3的位点是有效的，siRNA的构建是成功的；（3）利用FCM检测siRNA干扰前后A549细胞的细胞周期分布，提示siRNA能阻断A549细胞的细胞周期，使细胞周期停留在G0/G1期，不能进入S期，不能完成DNA的合成，无法进入M期，无法完成细胞的分裂；（4）利用FCM检测siRNA干扰前后A549细胞的凋亡水平变化，表明STAT3siRNA能诱导肺腺癌A549细胞的凋亡，STAT3的表达与A549细胞的凋亡密切相关。