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抗缪勒氏管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)作为评价卵巢储备功能的最有效标志物之一,不仅在女性生殖领域受到临床医师的重视,在新生儿和儿童内分泌疾病方面也引起越来越广泛的关注。因此,人体血清AMH浓度的检测逐渐成为医学实验室必须普及的项目,但AMH的检测方法和参考区间并无统一标准。迄今为止,国外已有多种AMH检测技术,而国内目前对AMH诊断试剂的研究尚处于发展阶段,本研究建立的抗缪勒氏管激素磁微粒化学发光检测方法,可快速、高敏感、高特异地对AMH进行检测。第一部分抗缪勒氏管激素磁微粒化学发光检测方法学建立为了对AMH体外诊断检测方法予以创新并在临床应用上提供参考依据,本研究通过试剂的筛选、反应体系及检测流程的优化、分析性能评价、参考值确立和稳定性研究等方面,来进行AMH磁微粒化学发光方法学的建立。结果显示:1试剂的选择方面,我们最终确定北京泽诚生物技术有限公司的AMH抗原2和AMH偶联物 Anti-AMH-AP(1.Oμg/mL)、Anti-AMH-FITC(0.5μg/mL)作为本方法建立的主要试剂。2反应体系及检测流程的优化方面,我们选择在AMH抗试剂的Tris缓冲液中添加0.5%BSA,并使用蛋白缓冲液 BUF3(Tris-HCl 缓冲液,150mmol/L,PH7.5,含 0.5%BSA、0.05%proclin300)配制校准品,以保证试剂及反应系统的稳定性。将加样模式定为30μL样本+30μL抗试剂A+30μL抗试剂B 15min+30μL磁微粒试剂5min+300μL清洗液清洗3次+200μL底物后在发光检测仪上进行测试。3分析性能评估方面,通过精密度、准确度、特异性、空白检出限、线性范围、方法学比对及钩状效应等对本方法予以评价。质控品1和质控品2的批内CV分别为2.31%和1.89%,批间CV分别为3.79%和6.64%;准确度在±4%之内,添加回收率96%;空白检出限达0.05ng/mL;在零含量AMH样本中分别加入100ng/mL抑制素A、100ng/mL激活素A、500mIU/mL 的黄体生成素(luteinizinghormone,LH),测得结果均不高于 0.07ng/mL,特异性较好,符合特异性检测要求;线性范围在0.07ng/mL-20ng/mL内,相关系数r=0.999;待测标本的AMH水平高达800ng/mL时仍未观察到钩状效应;本法和罗氏电化学发光法检验结果具有高度一致性,直线回归方程Y=0.996X+0.029,r=0.997,相关性良好。4通过对560份正常人样本的AMH检测值进行分析,采用百分位数法确定AMH的参考值范围。健康男性:1.43ng/mL-1 1.6ng/mL:健康女性:20-24 岁(1.66ng/mL-9.49ng/mL):25-29 岁(1.18ng/mL-9.16ng/mL);30-34 岁(0.672ng/mL-7.55ng/mL);35-39 岁(0.777ng/mL-5.24ng/mL);40-44 岁(0.097ng/mL-2.96ng/mL);45-50 岁(0.046ng/mL-2.06ng/mL)。5通过对试剂加速稳定性和开瓶稳定性分析,发现抗试剂在37℃条件下加速破坏9天后效价下降30%左右,校准品开瓶8h后稳定性良好,未见明显降解。本研究结果表明,抗缪勒氏管激素磁微粒化学发光定量方法的主要性能指标均满足了临床检测要求,灵敏度高,特异性强,适于临床推广使用。第二部分中枢性性早熟女童血清抗缪勒氏管激素的水平变化及意义为评价青春期前后女童的卵巢储备功能以及AMH对中枢性性早熟(centralprecocious puberty,CPP)的辅助诊断价值,我们应用新建立的方法对5-8岁CPP女童及正常发育女童进行血清AMH水平测定,比较了两组女童的卵巢功能是否具有显著性差异,并通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)判断AMH对女童CPP疾病的诊断效能。结果显示AMH水平在CPP女童中较正常女童有所上升(2.80ng/mL vs.2.10ng/mL),差异具有统计学意义(P<0.05),且身高及体重均明显增加。曲线下面积(areaundercurve,AUC)为0.681,当约登指数达到最大时,截取的AMH最佳诊断水平为2.0ing/mL。其中,灵敏度达到了 75%,特异度为63.33%。上述结果表明血清AMH水平对CPP女童的诊断具有一定的参考价值,为临床上评价CPP女童的卵巢储备及诊疗方案提供了一种新的思路。