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目的通过建立阿尔茨海默(AD)大鼠模型,观测其学习记忆、海马GSK-3β活性、磷酸化tau蛋白部分位点表达情况等,探讨艾灸在防治AD中可能的作用机制,为早期防治AD提供新思路和理论依据。方法用Morris水迷宫淘汰反应过于迟钝或敏感的大鼠,筛选出60只2月龄雄性SD大鼠,再随机分为假手术组12只、手术组48只。采用双侧侧脑室微量注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立拟AD大鼠模型,假手术组以柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液替代STZ注射。第9天去除术后死亡大鼠,再将手术组剩余36只随机分为模型组、对照组、艾灸组,每组各12只。术后第10天,艾灸组应用艾灸任督脉穴“关元”“长强”“命门”“百会”的方法干预一个月,对照组予西药盐酸多奈哌齐混悬液灌胃,假手术组、模型组不予处理。治疗结束后第2天,用Morris水迷宫测大鼠学习记忆能力,测试结束后第2天取材,用ELISA法、免疫组织化学、We stern blot、超微量ATP酶测试盒以及图像分析技术等手段,分别检测各组大鼠海马区GSK-3β活性及tau蛋白磷酸化位点(Ser396/Thr231)的含量和表达水平,额叶ATP酶活力变化以及光镜下观察大鼠海马CA1区形态学的改变。结果1、Morris水迷宫检测结果示模型组大鼠学习记忆能力明显受损,主要表现在前4天平均潜伏期明显延长,前4天平均游过的路径距离与总路程百分比(距离百分比)明显下降,空间探索实验中穿台次数减少,120s内平台象限停留时间短,差异具统计学意义(均P<0.05),而艾灸与西药盐酸多奈哌齐对术后大鼠的学习记忆能力有一定改善作用,主要表现在前4天平均游泳距离百分比较模型组上升,尤其是第3天、第4天距离百分上升,120秒停留时间较模型组延长,且象限转换次数增多(均P<0.05),且两种治疗效果差别不大(P>0.05)。此外,比较各组大鼠空间探索轨迹与策略有明显不同:假手术组轨迹集中在平台附近,搜索灵活反应快,但模型组搜索范围大,轨迹呈随机式或转圈式;艾灸组虽不如假手术组搜索集中且靠近平台,但较之模型组轨迹呈现出大鼠在较小的范围内不断变换方式搜索,说明艾灸能部分抑制学习记忆的损伤,效果与盐酸多奈哌齐差异无统计意义。2、ELISA检测大鼠海马GSK-3β活性结果示:造模后大鼠海马GSK-3β活性明显升高,而两种治疗方法对GSK-3β活性升高均有抑制作用;且盐酸多奈哌齐抑制作用大于艾灸,差异均具有统计意义。(均P<0.05)3、免疫印迹定量检测结果显示:模型组tau[p T231]、tau[p S396]相对表达量高于艾灸组、对照组(P<0.05),明显高于假手术组(P<0.01);艾灸与盐酸多奈哌齐治疗均可降低tau[p T231]、tau[p S396]过度磷酸化水平,且盐酸多奈哌齐抑制磷酸化水平的作用效果大于艾灸,差异均具有统计意义。(P<0.05)4、tau[p T231]、tau[p S396]的免疫组织化学染色定位定性观察结果示:低倍光镜下观察到模型大鼠海马CA1区及其神经元均有不同程度的破坏,甚至出现海马头部萎缩,但艾灸和盐酸多奈哌齐对海马CA1区及其神经元的损伤有一定的保护作用;高倍镜下,模型组海马CA1区椎体细胞形态结构异常,阳性细胞着色深,说明表达量增高,而艾灸及盐酸多奈哌齐阳性细胞着色较浅,说明两种治疗能降低其表达量,这与免疫印迹定量观察的结果相符。5、艾灸能明显升高AD模型大鼠额叶Na+K+-ATPase、Ca+Mg2+-ATPase及总ATPase活力(P<0.01),改善额叶能量代谢。结论1、双侧侧脑室内微量STZ注射可以使大鼠的学习记忆能力被明显破坏,使其无法通过定位航行实验记忆平台空间位置。但艾灸可在一定程度上保护AD模型大鼠学习记忆受损,进而改善其学习记忆能力,且作用效果与盐酸多奈哌齐相差不大。2、艾灸可一定程度抑制AD模型大鼠海马GSK-3β活性升高,降低海马神经元磷酸化tau蛋白位点Ser396、Thr231的表达,从而调控磷酸化tau蛋白的过度磷酸化水平,起到与盐酸多奈哌齐相同的防治AD的作用。3、本研究还发现艾灸可明显提升AD模型鼠的额叶ATP活力,能很好地改善额叶的能量代谢。