人参皂苷Rg5对人食管癌细胞作用的研究

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背景:随着我国经济取得巨大发展,人民生活和医疗水平得到极大提高,世界卫生组织发布的《2016世界卫生统计》报告显示中国的人均寿命为76.1岁。与此同时,癌症的发病率也随之增长。我国是食管癌的高发地区,发病率和死亡率均居世界之首,已造成巨大的社会负担。根据中国癌症现状年度报告所统计,在2011年,约有218,957人死于食管癌,被列为癌症的第四大原因死亡[1]。一项中国人群食管癌发病影响因素系统综述和Meta分析结果显示,目前我国食管癌的发病原因主要是饮食因素,诸如进食干硬、霉变食品等,吸烟亦为相关因素[2],目前认为基因易感性也可能是发病原因之一。在各种病理类型中,90%以上是食管鳞状细胞癌,其余为腺癌或其他特殊类型。目前,手术以及放化疗仍是治疗食管癌的主要手段,但是鉴于目前食管癌的发病率逐年上升,而食管癌早期诊断率仍低下,中晚期及不能手术治疗的食管癌治疗效果一般,预后差,因此,综合治疗是食管癌患者提高预后的主要治疗模式,包括术前新辅助、术后辅助放化疗、同步放化疗等。因食管解剖的特殊性和食管癌生物学特性,中晚期食管癌容易发生区域淋巴结转移,脉管浸润等,手术治疗并不能确保淋巴结清扫干净,术后辅助治疗必要性凸显,可以针对肉眼不可见的亚临床病灶予以杀灭。传统的化疗药物对食管癌治疗效果并不理想,目前主要是以DDP及5-FU或其衍生物联合方案,靶向药物吉非替尼,厄洛替尼等更多时候用于治疗食管癌的临床研究,疗效缺乏循证医学证据。免疫治疗同样被批准应用于临床,因其昂贵的价格及不确切的疗效让很多人望而却步。但是无论是传统的化疗药物或靶向药物仍无法避免肝肾功能损害及严重的骨髓抑制,这极大地限制了化疗药物的临床应用,很多情况因患者不能耐受而无法达到理想效果。针对食管癌治疗的新药研制如火如荼进行中,研究者积极的从祖国传统医学出发,利用祖国传统中医药材的基础,寻找其他中草药中类似紫杉醇一样具有强大抗癌能力的药物。祖国传统医学中人参具有极高的养生和药用价值,具有抗肿瘤,抗衰老,抗疲劳等诸多作用。近年来,人参的成份已被通过各种方式分离出来,包括人参皂苷、多糖以及肽类等。人参皂苷(ginsenoside,GS)是人参的主要有效成分,目前已有60种以上的人参皂苷被分离出来,含量约在4%左右。人参皂苷Rg3与和原人参二醇Rh2最多被应用于肿瘤细胞凋亡相关研究,各种体外实验均表明其具有较高的抗肿瘤活性。人参皂苷Rg5是近年来新分离出来的皂苷单体,分子量为767.01。目前已有体外细胞实验研究表明其对乳腺癌、宫颈癌细胞有抑制生长和诱导凋亡作用[3、4],但Rg5对人食管癌细胞作用的研究未见报道。目的:探索稀有人参皂苷Rg5对人食管癌Eca109细胞的作用,观察其对食管癌细胞生长状态的影响,并检测其对细胞周期影响及细胞凋亡情况,探讨相关机制。方法:本研究通过对人食管癌细胞株Eca109的培养,利用不同浓度人参皂苷Rg5作用于该细胞,通过CCK-8法在酶标仪下检测在同一时间不同浓度和同一浓度不同时间的作用下人食管癌细胞吸光度,通过计算其存活率或抑制率,以此来判断食管癌细胞的生长情况。同时,根据上述结果选合适的浓度进行细胞实验,检测不同浓度Rg5对食管癌细胞的周期影响及对细胞的凋亡的影响。结果:1.在一定浓度范围内,Rg5对食管癌Eca109细胞有抑制增殖作用,并呈现出浓度和时间依赖性;2.不同浓度Rg5作用食管癌Eca109细胞24h后,对细胞生长状态影响程度不同,随浓度升高,其生长状态变化越大;3.不同浓度Rg5作用食管癌Eca109细胞24h后,其对周期影响主要表现在S期和G2/M期增高,其中50、100umol/L组与对照组相比有明显差异(P<0.05),组间比较未见明显差异(P>0.05);4.不同浓度Rg5作用食管癌Eca109细胞24h后,其凋亡率随着Rg5浓度的增加而增加,实验组与对照组,实验组组间比较均有明显差异(P<0.05),呈现出剂量依赖性。结论:在一定浓度范围内,人参皂苷Rg5对人食管癌细胞有抑制增殖作用,能够引起细胞周期滞留,并能诱导细胞凋亡,且呈现出剂量依赖性。此为临床开发治疗食管癌新药提供一定的实验数据基础,具有潜在临床应用价值。
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