大鼠附睾特异抗菌肽Bin1b及其在小鼠中的同源基因的表达特性及功能研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fan8
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Binlb是一个大鼠附睾特异表达的抗菌肽,属于beta-defensin基因家族.过去的研究表明它的mRNA表达具有高度的时空特异性,体外的反义核酸实验证明它有抗菌功能,而它的表达特性提示它很可能具有生殖相关功能.该文的工作致力于取得Binlb的抗体和活性蛋白,以及大鼠Binlb在小鼠中的同源基因,为建立相关动物模型,进一步研究其功能打下基础.通过同源EST搜索和PCR的方法取得了大鼠Binlb在小鼠中的同源基因及其基因组序列.mRNA水平的表达特征分析表明小鼠Binlb特异地存在于附睾头部靠近体部的位置,其表达受雄激素调控,在成年鼠中水平最高.它表达出一个5kD的蛋白,与预测的成熟肽的大小相符.免疫组化表明其蛋白亦存在于附睾头部靠近体部的区域,并分泌到局部的管腔中.转染了小鼠Binlb的细胞的培养上清具有抗菌功能.与此同时,我们通过表达双拷贝串联的Binlb,取得了一个制备beta-defensin抗体较为有效的方法.该文制备了大鼠Binlb的抗体,通过免疫荧光实验发现Binlb能够和大鼠精子结合.联合香港中文大学陈晓章实验室的研究发现大鼠Binlb参与起始精子的运动,这一效应能够被Binlb的抗体所抑制.而且Binlb是通过L型钙通道对精子作用于精子的.我们通过硫氧还蛋白融合表达,并经蛋白酶切割,取得了具有抗菌活性的Binlb蛋白.此外,为给Binlb附睾特异性质提供一个参照,该文还初步研究了一个非大鼠附睾特异的beta-defensin, RBD-1,制备了它的抗体,通过免疫组化发现它的蛋白分布于整个附睾的亮细胞中.
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