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人的皮肤,和所有其他器官一样,随着年龄的增长不断发生老化。由于皮肤是机体与外界环境直接接触的器官,因此也经历着紫外线照射引起的皮肤的光老化现象。光老化皮肤很多的功能随着年龄的增长逐渐降低,并且由于皮肤发生氧化损伤,皮肤细胞中抗氧化酶的活性和非酶抗氧化剂的含量也随着年龄的增长不断下降。UVA可以通过诱导生成活性氧ROS(主要包括超氧阴离子、过氧化氢、和单线态氧)间接损伤DNA。ROS不但损害细胞DNA,还可参与脂质和蛋白质的氧化损伤,如胶原蛋白的降解。由UVA辐射引起的诱变还可能涉及反式尿酸的产生和基因表达的变化。皮肤生物学的最新研究进展已经阐明了光老化的发生机制,并提出了许多新的治疗方法以预防和改变该进程。绿茶中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是有效的抗氧化剂,目前已经见于众多的护肤品中。本研究用EGCG(?)呼育人皮肤成纤维细胞,然后进行UVA照射,目的是通过测试氧化损伤的指标,探讨EGCG在皮肤光老化过程中的功能。同时还研究了EGCG对VEGF、I型胶原、Ⅲ型胶原基因表达的影响,以观察EGCG对暴露在紫外线下的人体皮肤成纤维细胞的作用。以长波紫外线(UVA)辐射人皮肤成纤维细胞(HSF)建立光老化模型,在此基础上给予EGCG干预,探讨EGCG对UVA辐射条件下人皮肤成纤维细胞(HSF)的保护作用及其可能的保护机制。将人皮肤成纤维细胞株接种于100mm培养皿或96孔培养板中,用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基,于37℃、5%CO2培养箱中进行培养。将培养皿中的细胞随机分为3组：对照组,UVA组和UVA+EGCG组；并分别于UVA照射前、后加入相关药物进行干预处理。采用MTT法检测细胞活力；酶生化法测定胞浆中谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-px)、抗超氧阴离子自由基活力(A-SAC)、丙二醛(MDA)含量；荧光定量PCR法检测细胞血管内皮生长因子(VEGF)、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白基因的表达。试验结果分析采用单因素方差分析法,应用SPSS17.0进行数据处理,确定P<0.05作为差异显著性的标准。主要研究结果如下：1.EGCG对受UVA照射的成纤维细胞具有保护作用UVA照射成纤维细胞后,细胞增殖受到明显抑制,并呈现剂量依赖关系。但UVA照射前,以一定浓度的EGCG (40μg/mL以下)孵育2个小时,细胞的增殖活性明显增加。2. EGCG对受UVA照射的人皮肤成纤维细胞抗氧化活力的影响UVA照射后,经过EGCG孵育的人皮肤成纤维细胞GSH-Px活力和抗超氧阴离子活力明显高于未经EGCG处理的细胞,但脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平则降低。这说明,EGCG可以通过增加抗氧化酶的活性和减少脂质的过氧化作用对人皮肤成纤维细胞起保护作用。3. EGCG对受UVA照射人皮肤成纤维细胞胶原蛋白基因表达量的影响UVA辐射抑制体外培养真皮成纤维细胞的胶原合成。真皮成纤维细胞受UVA照射后,Ⅰ型和Ⅲ型胶原基因的表达量显著降低。若在接受UVA照射前细胞以一定浓度的EGCG孵育2小时,可显著提高胶原基因的表达水平。说明EGCG可部分减轻UVA对Ⅰ型和Ⅲ型胶原基因表达的抑制作用,对皮肤的光老化有一定的保护作用。4. EGCG对UVA照射人皮肤成纤维细胞VEGF基因表达量的影响UVA照射成纤维细胞24h后,VEGF的表达显著增高。显示UVA辐射可刺激血管内皮生长因子分泌,EGCG处理可以抑制UVA照射引起VEGF的过度表达。本研究的的主要结论是：UVA可以剂量依赖的方式抑制人皮肤成纤维细胞增殖,EGCG处理能减轻UVA对细胞增殖活性的抑制；其可能的作用机理是：EGCG可以通过增加抗氧化酶的活性,减少脂质的过氧化,减轻UVA对Ⅰ型和Ⅲ型胶原基因表达的抑制作用,抑制VEGF的过度表达,从而减轻UVA对皮肤光老化产生保护作用。