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G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors,GPCRs)作为重要的跨膜蛋白,其结构和功能受与之相互作用的蛋白质和脂质分子调控。脂筏是细胞膜上富含特殊脂质与蛋白质的微结构域,能够作为平台组织特异的GPCRs信号复合体,并调控其信号转导的效率与特异性。大部分GPCRs通过棕榈酰化修饰定位在脂筏中,并受棕榈酰转移酶与硫酯酶的可逆性双重调控,与受体活性及生理状态密切相关。GPCRs棕榈酰化修饰动力学过程对其胞内转运及膜上侧向分选的影响是当前的研究热点。GABA_BR是C族GPCRs的重要成员之一,通过GB1与GB2两个亚基形成的异源二聚体来行使功能。研究发现在小脑颗粒神经元中,GABA_BR通过转激活IGF-1R介导神经保护功能。基于活性的小分子光敏探针(ABPP)垂钓发现GABA_BR转激活IGF-1R所诱导的不同信号蛋白的磷酸化需要形成一个大的蛋白质复合物,复合物中不同蛋白的时空变化如G蛋白的释放和受体酪氨酸激酶IGF-1R的结合对GABA_BR诱导的相关生理学效应至关重要。另一方面,研究证实GABA_BR在静息状态下定位在脂筏中,激活后则转运出脂筏。脂筏在GABA_BR转激活IGF-1R过程中扮演什么角色,GABA_BR信号复合体的时空变化与脂筏有何相关性,GABA_BR在脂筏中的定位机制及调控因素是什么,迄今为止还没有相关研究。本文以过表达的HEK293细胞和原代培养的小鼠小脑颗粒神经元细胞作为模式细胞,首先通过MCD破坏脂筏结构的完整性,发现GABA或Baclofen诱导的IGF-1R的磷酸化水平显著下降。进一步通过酰基生物素交换(ABE)实验发现GB2亚基C末端第874位的半胱氨酸发生棕榈酰化修饰,GB2-C874A突变体在脂筏中的定位显著下降。在保持脂筏完整性的前提下,通过突变棕榈酰化修饰破坏GABA_BR在脂筏中的定位导致GABA诱导的IGF-1R磷酸化水平-处理时间曲线发生显著迁移。随后通过抗去垢剂抽提的蔗糖密度梯度离心技术检测GABA_BR激活后信号复合体的主要组分在脂筏及非脂筏区域的定位变化,发现野生型GABA_BR与GB2-C874A突变体在激活后在脂筏内外的运动趋势存在显著差异。最后,通过生物素标记的ABPP垂钓发现脂筏对于GABA_BR信号复合体成员的时空变化有重要影响,用MCD破坏脂筏会阻滞G蛋白的释放,并破坏IGF-1R的结合。上述研究表明脂筏是GABA_BR转激活IGF-1R信号复合体在膜上的反应平台,完整的脂筏结构以及GABA_BR在脂筏区域的正常定位是该信号复合体行使正常功能所必须的;在转激活过程中,GABA_BR信号复合体的主要成员发生在脂筏中富集-出脂筏的侧向分选变化;脂筏对信号复合体成员的时空变化如G蛋白的释放及IGF-1R的结合有显著影响。从而为研究GABA_BR信号转导效率的调控机制奠定了一定基础。分析GABA_BR在膜上的侧向分选与胞内循环之间的相关性将是下一步工作的重点。