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紫杉醇是一种高效、低毒、广谱的天然抗肿瘤药物,但目前药源紧缺。利用产紫杉醇微生物发酵是解决问题的有效途径之一,但目前存在紫杉醇产量低,难以实现产业化的问题。基因工程技术是提高微生物合成次生代谢物产量的有效手段,其中遗传转化方法和启动子表达效率等是基因工程技术成功的关键因素,本研究对这些关键因素开展了研究,并取得了如下主要研究结果:(1)优化了基因枪介导的枝状枝孢霉MD2转化体系的有关参数,建立了高效、稳定的以基因枪介导的枝状枝孢霉MD2遗传转化体系。结果表明:在真空度20mg Hg,受体孢子浓度108个/ml,DNA用量0.3μg/枪,轰击压力1350psi,轰击距离7cm时的条件下转化效率最高,获得阳性转化子100±5/μg质粒DNA;(2)比较了真菌紫杉醇合成过程中不同启动子的表达效率,通过分析trpC启动子、gpdA启动子和CaMV35S启动子在枝状枝孢霉MD2中调控绿色荧光蛋白(gfp)基因在MD2中的表达情况,结果表明启动子CaMV35S的表达效率最低,而真菌源启动子gpdA表达效率最高,是CaMV35S的2.95倍;(3)构建了以高效启动子gpdA驱动紫杉醇合成途径中关键酶10-去乙酰巴卡亭III-10β-乙酰转移酶基因(dbat)的表达载体p1303-PgpdA+dbat,并通过基因枪介导的遗传转化方法,成功实现了在枝状枝孢霉MD2中的转化,通过对转p1303-PgpdA+dbat转基因菌株的生物量和紫杉醇产量进行分析,结果表明:紫杉醇的产量较野生菌株提高了1.67倍,而生物量则下降了约10%。以上结果表明,本研究获得了较好的产紫杉醇真菌的高效转化体系和驱动效率较高的启动子,为构建紫杉醇高产的基因工程菌株奠定了基础。