背景与目的慢性代谢性疾病（chronic metabolic diseases）是一组以肥胖、高血压、糖尿病、血脂异常、冠心病、脑卒中等疾病为主的代谢性临床症候群。代谢性疾病已成为严重影响人类健康的一组疾病，在遗传因素较为固定的背景下，环境因素显得尤为重。随着微生物技术的发展，分子微生物学较多的运用于肠道菌群的研究。在人体肠道内，结肠的微生物分布最密集，不同物种，肠腔分布的细菌群落种类及数量不同，由于技术和伦理学限制，只能通过对人体或动物模型粪便中提取的菌群研究分析，但粪便菌群是否可以反映肠道内主要菌群不得而知。许多研究将肠道微生物诠释为环境因素影响宿主营养、代谢及免疫功能，对人体健康十分重要。目前,体内肠道菌群失调和低活度慢性炎症状态发挥的重要作用在糖尿病及其并发症的发展中逐渐被关注。二甲双胍作为2型糖尿病患者的一线用药，其治疗效果随英国（UKPDS）结果公布得到充分肯定。关于二甲双胍对2型糖尿病患者肠道菌群的影响作用和机制鲜见报道。本研究旨在应用ERIC (enterobacterial repetitive intergenic consensus，肠道细菌基因间重复序列)-PCR技术建立各组肠道细菌DNA指纹图谱，初步探讨服用二甲双胍后是否可以纠正2型糖尿病患者肠道菌群失调、改变其慢性炎症状态及代谢紊乱，为其降糖外收益提供依据。对象与方法1.1对象10例2013年2月至2013年6月于郑州大学第一附属医院内分泌科住院的2型糖尿病患者，年龄38～45岁，糖尿病病程0.3-6年。入选标准：符合1999年世界卫生组织（WHO）的T2DM诊断标准。1.2标本收集实验组给予（二甲双胍片0.85g tid）,规律应用2周，收集用药前、后患者新鲜粪便，密封于无菌厌氧袋；并抽取用药前后外周血，于4000rpm离心10min，取上清，所有标本于半小时内置于-80°冰箱内保存。同时观察服药前后血糖（空腹、三餐后）、血脂、炎性因子（血清中C反应蛋白、白细胞介素6、脂多糖）变化。收集10例健康人新鲜粪便及外周血作为对照。1.3实验试剂及仪器肠道菌群DNA基因组提取试剂盒；琼脂糖、无菌PCR小管；DNA marker、Dream Taq Green PCR Master Mix、Green-DNA Dye核苷酸胶体染料、引物；Biometra PCR；电泳仪；紫外凝胶成像系统；ELISA试剂盒；血糖仪；单道移液器；DNA浓度测定仪；高速台式离心机等。1.4实验步骤1）肠道菌群总DNA提取将粪便标本置于冰上解冻，用生理盐水洗涤，4000rpm离心1分钟取沉渣300g于灭菌EP管内，使用肠道菌群基因组DNA试剂盒，并按说明书步骤提取DNA。吸取2ulDNA样本用浓度议测定浓度。2）PCR扩增应用ERIC-PCR指纹图谱分析技术进行扩增，特异性引物序列ERIC1(5’-ATG AAG CTC CTG GGG AAT CCA一3’)，ERIC2(5’-AAG TAA GTG ACTGGG GTG ATG CG一3’)。PCR小管加入反应体系25μl：Dream Taq Green PCRMaster Mix12.5μl，ERIC10.5μl，ERIC2μl，water5.5μl，DNA模板量6μl（约80ng）。3）电泳成像产物电泳后在凝胶成像分析系统内观测电泳条带并拍照。4）指纹图谱分析。5）炎性因子的检验将血清标本置冰上解冻，应用ELISA试剂盒测定血清炎症因子水平。6）其他监测空腹及三餐前、餐后2h末梢血糖，于本院检验科行生化指标测定。1.5统计方法应用SPSS17.0统计学数据处理软件分析，连续型变量用均数±标准差（X±S）表示，两样本定量资料的比较应用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。结果1.用药后空腹血糖、餐后2h血糖、血总胆固醇（T-CHO）、血清C反应蛋白（CRP）、脂多糖（LPS）、白细胞介素-6（LI-6）水平均较用药前下降，差异有统计学意义(P＜0.05)，差异具有统计学意义(P＜0.05)；血甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）水平较前下降，血高密度脂蛋白（HDL）水平较前升高，但差异均无统计学意义(P＞0.05)；2. ERIC-PCR指纹分析图谱显示健康人肠道菌群的DNA条带数目明显多于T2DM患者，且较亮主条带位置不同，个体DNA较亮主条带呈散在分布，成多样性分布；T2DM患者肠菌指纹图谱条带表现单一，且较量主条带位置与正常人不同；服用二甲双胍后T2DM患者肠道菌群的DNA条带数目增多，且较亮条带位置改变，与健康人相似。结论1.应用二甲双胍治疗2周后，T2DM患者血清中C反应蛋白、TNF-a、IL-6、LPS水平均较治疗前明显下降，表明二甲双胍有助于降低炎症因子水平、改善患者慢性炎症状态，有利于改善血糖、血脂水平，同时已有研究表明二甲双胍的抗炎作用是独立于降糖作用之外。2.通过分析本研究所获得的肠道菌群ERIC-PCR指纹图谱，正常人肠道菌群种类多样化，优势菌群数量较多，2型糖尿病患者肠道菌群结构多样性降低，且优势菌与健康人不同，体内存在肠道菌群失调。应用二甲双胍治疗后，2型糖尿病患者肠道菌群的群落构成比明显变化，种类增多，且优势菌群与健康人相似。本研究仅可初步观察给予二甲双胍后糖尿病患者肠道菌群的变化趋势，尚不能明确肠道菌群的种类、数量的具体变化，需进一步研究。