罗非鱼链球菌病为罗非鱼感染链球菌后导致一系列生理病变最终致死的恶性传染病。由于该病发病快、传染性强、死亡率高,易引起大规模疫情暴发。该病已给世界水产养殖业带来巨大的经济损失。广东省作为国内罗非鱼的主产地,由于近年来罗非鱼链球菌感染呈现增长趋势,因此需大力研究防治罗非鱼链球菌病的手段。目前鱼链球菌病的防治措施主要有生态防治、免疫防治和化学药物防治。其中生态防治可降低链球菌病爆发率,但对水质影响较大,抑制鱼类生长。免疫防治为目前研究较多的防治手段,其疫苗种类繁多,更新较快,但其易失活,且注射操作繁琐。化学药物防治多用抗生素,其起效快,药效强,但易产生耐受性和药物残留。因此,针对以上防治手段的优缺点,急需开展新防治手段的研究。现代药理研究表明,清热解毒、清热燥湿等药物有明显抗菌作用,多数中药及其复方有广谱抗菌作用,具有恢复人体微生态平衡,调节免疫,增强抗感染的特点,让中药在解决细菌抗药性问题与一般防治措施相比具有一定优势。因此中药防治链球菌病具有一定的实际意义。目的:针对罗非鱼链球菌病的爆发与流行,通过确定罗非鱼链球菌病致病株种属,针对性的进行多种中药提取物的体内、体外药效学实验,拟寻找药效明确的中药有效成分,为相关新产品的开发提供实验依据。方法:鉴定实验确定菌株种属,并进行体外药敏试验,从23种中药的水提物和醇提物中筛选出具有高敏感性的中药提取物,进而进行动物药效学研究,从死亡率、(LSZ)血清溶菌酶、(T-SOD)超氧化物岐化酶、(CAT)过氧化氢酶、(NO)一氧化氮、(MDA)丙二醛、(GPT)谷丙转氨酶、(GOT)谷草转氨酶指标反映中药提取物抗菌、杀菌、抗氧化的能力,进而确定该中药提取物的疗效。1.菌种的鉴定:取自病鱼的菌株经分离纯化菌种后,依次采用显微鉴定、生化鉴定、PCR鉴定,鉴定该菌种的种属。2.药敏试验:采用纸片法,对23种中药的水提物和醇提物进行筛选,选取具有高度敏感性的中药提取物进行MIC和MBC的测定和体外杀菌曲线的绘制。3.致病性实验:通过致病性实验,确定其毒力,以0.05mL/10g的菌液剂量腹腔注射无乳链球菌进行攻毒造模,观察7d,测定死亡率,观察其腹腔和内脏的感染情况。对内脏组织取样进行体外细菌培养观察。通过造模实验确定最佳造模浓度。4.药效学实验:对正常罗非鱼进行投料给药,药剂量为2.5g/Kg·d。连续给药21d,给药第15d,用最佳造模浓度的链球菌菌液对给药组和模型组进行腹腔注射,注射剂量为0.05mL/10g。统计15-21d内罗非鱼的累计死亡数并取肝脏和血清,测定死亡率及 LSZ、CAT、T-T-SOD、NO、MDA、GOT、GPT 指标。结果:1.体外实验:经显微鉴定、生理生化鉴定、PCR鉴定,该试验菌种为罗非鱼源性无乳链球菌。从体外药敏试验筛选出溪黄草、苦参、五倍子醇提物3种对罗非鱼源性无乳链球菌具有高敏感性的供试品。体外杀菌曲线显示五倍子、溪黄草、苦参供试品均有较强的体外抑菌杀菌作用,在细菌生长调整期内即发挥抑菌作用。2.体内实验:确定最佳造模浓度为2.58×105CFU/mL。溪黄草、苦参组可降低罗非鱼的死亡率;溪黄草、苦参组可增加血清中溶菌酶含量,五倍子组降低血清中溶菌酶含量;溪黄草、五倍子、苦参组降低肝脏组织中NO含量;溪黄草、苦参、五倍子组可降低肝脏组织中MDA的含量;溪黄草、五倍子组可增加肝脏组织中CAT含量;五倍子、苦参、溪黄草组可增加肝脏组织中T-SOD含量;溪黄草、五倍子、苦参组可降低GPT活力和GOT活力。以上实验结果均有统计学意义(P<0.05)。讨论:从体外药敏试验和体外杀菌曲线中显示五倍子、溪黄草、苦参供试品均有较强的体外抑菌杀菌作用。其中溪黄草、苦参供试品可降低罗非鱼死亡率。溪黄草供试品的抑菌作用,与其调控病鱼体内LSZ含量、CAT含量,MDA含量、NO含量、GOT和GPT含量,产生抗氧化的作用相关;苦参供试品的抑菌作用,与其调控病鱼体内LSZ含量、T-SOD含量,MDA含量、NO含量、GOT和GPT含量,产生抗氧化的作用相关;五倍子供试品的抑菌作用,与其调控实验病鱼体内CAT含量、T-SOD含量,MDA含量、NO含量、GOT和GPT含量,产生抗氧化的作用相关。以上实验结果均有统计学意义(P<0.05)。