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核酸有贮藏,复制和转移遗传信息的功能,它作为生物的基本遗传物质,在生物的整个生命活动的各个阶段中都占有非常重要的地位。一些特殊mRNA的表达水平与肿瘤负荷和恶化程度密切相关,对此类mRNA的检测为在早期基因水平发现肿瘤细胞提供了新方法,给疾病的诊断以及药物的开发提供了方向。因此需要有更多的方法可以在单细胞水平上高灵敏度地检测mRNA。荧光原位杂交技术(FISH)已用于mRN A的检测成像,而信号放大技术能够提高传统荧光原位杂交技术的灵敏度和特异性。本论文基于荧光原位杂交技术与非酶恒温信号放大技术联用,设计了两种检测细胞内mRNA的方法：(1)基于超级三明治信号放大技术和荧光原位杂交技术设计的一种新型细胞内mRNA检测方法。该方法中,设计一个与目标InRNA互补杂交的发卡探针作为识别探针,两个标记了相同荧光基团的直链DNA作为报告探针,当有目标mRNA存在时识别探针与之杂交被打开,暴露出一段可以引发报告探针发生超级三明治杂交的DNA序列,报告探针相互杂交形成一条很长的带有缺口的DNA双链。由于报告探针的叠加,导致荧光基团的叠加,从而实现信号放大。这种超级三明治荧光原位杂交(SFISH)技术可以在单细胞水平上,高灵敏度、高选择性的快速原位检测1nRNA,与传统FISH相比信号放大了5倍,有望用于固定细胞、胚胎、组织切片和斑马鱼等生物环境。(2)基于荧光共振能量转移(FRET)、杂交链式反应(HCR)以及荧光原位杂交技术设计的一种对细胞内mRNA检测的方法。该方法中,设计一个可以与目标mRNA分子进行原位杂交的发卡探针作为识别探针,两个分别标记了供体荧光基团和受体荧光基团的发卡探针作为报告探针。当有目标mRNA存在时,识别探针与之杂交并打开,会暴露出一段可以引发两条报告探针发生杂交链式反应的DNA序列。由于报告探针的互相杂交,供体荧光基团与受体荧光基团会靠近并发生荧光共振能量转移效应,并且伴随着FRET荧光信号的累加,从而实现信号放大效果以及免洗脱检测步骤。这种基于FRET的杂交链式荧光原位杂交技术进一步提高了目标物检测的特异性,具有灵敏度高选择性好,节省了洗脱步骤,操作简便等优点。