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蓝舌病(Bluetongue，BT)是由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起的，依靠媒介昆虫（库蠓、伊蚊等）在反刍动物之间传播的一种烈性非接触性的传染病。纯种细毛羊对该病最敏感。BT最早于1876年被发现，目前在热带和温带的多个国家都已分离到BTV，并且该病的分布范围在不断的扩大，呈现全球性分布的趋势。我国于1979年第一次发现该病的存在，目前在我国29个省份已检测到感染BTV阳性的病畜。迄今为止，全世界范围内共分离到26种不同血清型的BTV，且不同的血清型之间无交叉保护作用。 BTV基因组由10个双链RNA组成，包括大片段(L1-L3)、中片段（M4-M6）和小片段(S7-S10)。其共编码7个结构蛋白(VP1-VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a和NS4)。VP7是由S7基因编码的主要结构蛋白，由349个氨基酸组成，位于病毒核衣壳的表面，约占病毒核心蛋白总量36％。VP7是BTV的群特异性抗原，不同血清型之间的VP7蛋白的同源性高达94％。VP2由L2基因编码，在不同血清型病毒间保守性最低。VP2蛋白主要参与病毒的吸附和进入，与病毒的毒力有关。VP2可诱导产生中和抗体，是BTV型特异性抗原主要的决定因素。25型BTV是2008年从瑞士山羊血液样本中分离获得。25型BTV的VP2与其他血清型病毒VP2的同源性仅为23％-79％。因感染25型BTV的牲畜无典型症状，故常被忽略。但是一旦爆发，发病率和死亡率较高。因此建立针对25型BTV的特异性血清学检测方法对BTV的防控有重要的意义。 本研究为制备25型BTV的VP7和VP2蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibody，McAb)，利用原核表达系统pET-28a(+)和pGEX-6P-1表达VP7蛋白，分别命名为VP7a和VP7p。经SDS-PAGE和Western blot分析大小依次为44 kDa和64 kDa，与预期蛋白大小一致。采用原核表达系统pET-28a(+)和pMAL-c5X部分重叠表达三段VP2蛋白，分别命名为VP2-A、VP2-B、VP2-C和VP2-A1、VP2-B1、VP2-C1。经SDS-PAGE和Western blot分析，大小依次为50kDa、48kDa、48kDa、84 kDa、82 kDa和82 kDa，与预期蛋白大小一致。分别将重组蛋白VP7a和重组VP2-A、B、C作为免疫抗原，腹腔免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术将骨髓瘤细胞SP2/0与免疫后小鼠的脾细胞进行细胞融合，通过有限稀释法进行细胞亚克隆，获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞。分别以VP7p和VP2-A1、B1、C1蛋白作为包被抗原，利用间接ELISA方法进行McAb的筛选。共获得5株稳定分泌抗25型BTV VP7的杂交瘤细胞株，分别命名为3H7、5F12、6E10、6G11和1C8;同时筛选出2株针对VP2蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为2E7和5B3。经抗体亚类试剂盒鉴定除1C8为IgM外，其余各株皆为IgG。2E7和5B3经抗体亚类试剂盒鉴定分别为IgG1和IgG2b。经连续传代并冻存复苏后，以上7株杂交瘤细胞皆可稳定分泌抗体，具有良好的稳定性。间接免疫荧光鉴定结果显示，3H7可与8型BTV发生特异性结合，其余各株皆不发生反应，说明该株单抗能够特异性地识别8型BTV，且不与赤羽病病毒(AKAV)、茨城病毒(IBAV)、猪轮状病毒(PRV)发生交叉反应，表明单抗具有良好的特异性。Western blot结果证明，3H7单抗能识别重组VP7蛋白;2E7和5B3可特异性识别重组VP2蛋白。抗原表位叠加试验结果表明，五株针对VP7蛋白的单克隆抗体，3H7、6E10和1C8针对不同的抗原表位，而5F12和6G11针对相同的抗原表位;两株针对VP2的单抗识别的是不同的抗原位点。重组VP7、VP2蛋白和相应的单克隆抗体为25型BTV血清学检测方法的建立及VP7和VP2蛋白的结构与功能研究奠定了物质基础。