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本研究以胞内劳森氏菌阳性猪回肠粘膜DNA为模板,通过PCR和Nested-PCR的方法扩增出胞内劳森氏菌四个抗原候选蛋白(即外膜蛋白OMP1022、外膜蛋白OMP0902、外膜蛋白OMP1024和表面脂蛋白SLP0235)的基因序列,并分别构建T-A克隆质粒,再亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中得到原核表达质粒pET32a-OMP1022、pET32a-OMP0902、 pET32a-OMP1024和pET32a-SLP0235,酶切鉴定及序列测定表明,重组表达质粒构建正确。将原核表达质粒pET32a-OMP1022、pET32a-OMP0902、 pET32a-OMP1024和pET32a-SLP0235转入宿主表达菌BL-21(DE3)中,IPTG诱导表达,重组蛋白1022和0902获得表达,而重组蛋白1024和0235末表达或表达量过低。分两段扩增OMP1024,得到1024a和1024b,并构建得到原核表达质粒pET32a-OMP1024a和pET32a-OMP1024b,转入宿主表达菌BL-21(DE3)中,经IPTG诱导后均得到表达。Western-blot证实重组蛋白1022、0902、1024a和1024b均有较好的抗原性。重组蛋白1022为可溶性表达,其余以包涵体的形式得到表达。Ni2+亲和层析法进行纯化获得纯化蛋白。Western-blot验证纯化复性后重组蛋白的抗原性,结果显示均具有良好的抗原性,其中重组蛋白1024b的抗原性最强。以纯化后的重组蛋白1024b作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,优化后确定最佳反应条件为：抗原包被浓度为0.5μg/mL,37℃包被2h；血清稀释40倍,37℃反应1h；二抗稀释8000倍,37℃反应30min; TMB底物室温显色10min。用优化好的ELISA反应条件检测20份阴性血清,确定阴阳性临界值为0.321。血清吸附试验、交叉反应试验和竞争性抑制试验证明LI-1024b间接ELISA具有很好的特异性。利用建立好的LI-1024b间接ELISA检测采自广西部分地区不同年龄段猪群的648份临床血清,有436份为阳性,总阳性率为67.3%。其中南宁、柳州、桂林、贵港和玉林地区猪群的阳性率分别为52.7%、81.1%、76.5%、68.0%和71.8%。哺乳仔猪、保育猪、育肥猪、母猪和公猪的阳性率分别为50%、30.8%、61.9%、92.4%和88.6%。