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研究背景及目的格林-巴利综合征(Guillain-Barre Syndrome, GBS)是一种与感染等因素相关的神经系统自身免疫性疾病,虽发病机制尚不清楚,但目前认为前驱感染的病原微生物表达的糖脂抗原所诱导的分子模拟机制为其可能的发病机制。CD1抗原呈递分子(Cluster of defferientiation, CD)是一种可识别糖脂、脂类抗原并将其呈递给抗原特异性T淋巴细胞的MCH(主要组织相容性复合体)样糖蛋白,在格林-巴利综合征炎症反应的启动过程中发挥着决定性的作用。研究发现在人类第1号染色体上共存在有5种位置上紧密连接的CD1基因(CD1A,CD1B,CD1C,CD1D,CD1E),均在其外显子2区存在基因变异,具有多态性,然而仅引起CD1A与CD1E分子的氨基酸置换。研究表明,这种多态性在欧洲人、美洲人以及中国人及其少数民族等正常人群中均有表现。CD1分子与神经免疫性疾病(如：多发性肌炎、重症肌无力、多发性硬化等)的关系也有报道,目前国外对GBS与CD1基因多态性的研究较少,意大利学者Caporale等研究了意大利的GBS患者,认为CD1基因多态性在GBS患者和正常人群间有明显差异,而荷兰学者Kuijf等研究了北欧GBS患者与正常人之间CD1基因多态性的关系,得出了两组间无显著性差异的结论。中国人中GBS患者与CD1基因多态性的关系如何尚无报道。因此有必要研究CD1基因多态性尤其是CD1A与CD1E基因多态性与GBS遗传易患性之间的关系,以便从分子水平来探讨GBS的免疫遗传发病机制。资料与方法收集2008年7月至2010年08月于我院住院的GBS患者共56例,其中男性35例,女性21例,年龄11～55岁,平均(31.2±5.3)岁。GBS的诊断标准参照Asbury(1990年版)。对照组为健康志愿者或患者家庭中与患者无血缘关系的成员,共67名,均为近期无感染临床相关症状,并排除患有自身免疫性疾病病史者,男性40例,女性27例,年龄10～57岁,平均(32.3±6.7岁)。1. ELISA法检测血清空肠弯曲菌IgM抗体：清晨空腹抽取GBS组患者及健康对照组患者静脉血3ml于无抗凝剂的真空采血管中。吸取上层血清约0.5ml于Eppendorf管中。所有血清标本均放置于-40℃低温冰箱保存,准备进行同批测定。按照人空肠弯曲菌IgM ELISA试剂盒操作步骤来测定血清标本中IgM抗体水平。2.CD1A,CD1E基因多态性检测：抽取GBS组患者及健康对照组患者静脉血2ml于EDTA抗凝管中,所有静脉血标本均保存于-40℃低温冰箱中。应用全血基因组DNA提取试剂盒,自抗凝血中提取DNA,随后PCR扩增全血基因组CD1A与CD1E外显子2区基因片段,琼脂糖凝胶电泳确定PCR产物。最后,应用限制性内切酶酶切PCR产物,再进行2%琼脂糖凝胶电泳产生3种不同的电泳条带,即不同的基因型。结果一.GBS患者血清空肠弯曲菌(CJ)感染率的比较1.56例GBS患者血清空肠弯曲菌感染IgM抗体阳性36例,感染率为64.5%,67例正常对照组血清空肠弯曲菌感染IgM抗体阳性12例(17.9%),与GBS组比较差异有统计学意义(P<0.01)。2.56例GBS病例脱髓鞘型32例,脱髓鞘及轴索损害型24例；36例GBSCJ-IgM+病例中脱髓鞘型22例,脱髓鞘及轴索损害型14例；两组患病类型相比无显著性差异(P>0.05)。3.36例GBS CJ-IgM+抗体含量与在轻度患者组与重度患者组中不同,轻度患者组(Hughes评分1-3分)IgM含量为31.86±10ng/L,重度患者组(Hughes评分4-6分)IgM含量为65.19±12ng/L,两组相比IgM含量具有显著性差异(P<0.05),重度组患者IgM含量高于轻度组患者。二.CD1A、CD1E基因多态性检测CD1A及CD1E外显子2区基因片段经PCR扩增,限制性内切酶酶切,琼脂糖凝胶水平电泳后,均产生3条不同的电泳条带(即不同的基因型)。CD1A01/01(-G/G)纯合子有HaeⅢ酶切点,可被完全酶切为287bp与159bp两条带,CD1A01/02(-G/C)杂合子产生完全酶切,出现446bp,287bp,159bp 3条带,CD1A02/02(-C/C)纯合子不产生酶切,只出现446bp一条带。同样,CD1E01/01(-G/G)纯合子有MspI酶切位点,可完全酶切为258bp,176bp两条带,CD1E01/02(-G/A)杂合子产生完全酶切,出现434bp,258bp,176bp三条带,而CD1E02/02(-A/A)纯合子则不产生酶切,只出现434bp一条带。1.GBS组CD1A01/01基因型2例,CD1A01/02基因型7例,CD1A02/02基因型47例；健康对照组CD1A01/01基因型8例,CD1A01/02基因型21例,CD1A02/02基因型38例,两组之间基因型分布的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。GBS组CD1A01的等位基因频率为9.82%,较健康对照组(27.61%)明显降低(P<0.01)。GBS CJ-IgM+组CDlA基因型及等位基因频率与GBS组类似,与健康对照组对比差异显著(P<0.05)。2.GBS组CD1E01/01基因型18例,CD1E01/02基因型28例,CD1E02/02基因型10例；健康对照组CD1E01/01基因型27例,CD1E01/02基因型31例,CD1E02/02基因型9例,两组之间基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。GBS组CD1E等位基因频率与对照组无明显差异(P>0.05)。GBS CJ-IgM+组CD1E基因型及等位基因频率与GBS组类似,与健康对照组对比无显著性差异(P>0.05)。结论1.空肠弯曲菌(CJ)感染与GBS发病密切相关,进一步证实空肠弯曲菌可能为GBS发病原因之一。空肠弯曲菌(CJ)感染不影响GBS脱髓鞘型与轴索型之间的分型。2.GBS重症患者空肠弯曲菌IgM抗体含量显著高于轻症患者。3.GBS患者携带CD1A01等位基因频率显著低于健康对照组,GBS患者组CD1A01/01与CD1A01/02的基因型频率也显著低于健康对照组。提示：(1)在GBS组和健康对照中CD1A基因均具有多态性；(2)CD1A基因的多态性在GBS患者与健康对照组之间存在显著性差异；(3)携带有CD1A01等位基因的个体较不携带者发生GBS的危险性降低,提示CD1A基因外显子2区51G→C的多态性与GBS的遗传易患性有关,CD1A基因可能是GBS的一保护性基因。4.GBS组与健康对照组中,CD1E01/01与CD1E01/02基因型频率和CD1E01与CD1E02等位基因频率均无显著性差别。提示：(1)在GBS组和健康对照中CD1E基因均具有多态性；(2)CD1E基因的多态性在GBS组患者和健康对照组之间不存在显著性差异;(3)CD1E基因的多态性并不影响GBS在人群中的罹患率。CDlA基因多态性可能通过影响CD1分子与β2微球蛋白及其附属分子的结合,干扰其对脂类抗原的识别与呈递,从而影响不同个体对GBS的易患性与免疫应答的起始过程。创新1.创新性提出CJ感染是导致严重型GBS的因素之一。2. CD1A01基因可能做为一种保护性基因使如CJ中的脂类抗原无法递呈从而不能启动免疫而免于罹患GBS。