葛根黄酮的提取分离及抗氧化活性研究

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葛根在我国分布广泛,是药食两用植物。目前,对于葛根黄酮的分离纯化研究大都采用大孔吸附树脂,本文采用天然澄清剂纯化葛根黄酮,并与大孔树脂的纯化作比较。本文的主要研究内容和结果如下:1、颜色反应试验,表明葛根中含有黄酮类物质。运用薄层色谱法对葛根总黄酮组分进行初步定性鉴定,选用三氯甲烷-甲醇-水(9:4:0.5,v/v),乙酸乙酯-丙酮-甲苯-水(10:8.5:1.0:1.7,v/v),乙酸乙酯-丙酮-甲苯-水(11:9:1.0:1.7,v/v)为展开剂进行试验。结果表明,以三氯甲烷-甲醇-水(9:4:0.5,v/v)为展开剂,样品展开很快,且分离效果较好。葛根素在254nm紫外灯下呈浅蓝色荧光斑点,365nm紫外灯下呈亮蓝色荧光斑点,葛根黄酮提取物与葛根素标准品有相同的比移值,Rf值为0.51,说明葛根黄酮中含有葛根素,葛根素在薄层板上能够被很好地检测出来。2、对葛根黄酮的提取工艺进行了探讨,考察了溶剂浓度、提取时间、提取温度和料液比四个单因素对葛根黄酮提取率的影响,在单因素实验的基础上,运用响应面实验,建立了溶剂浓度、提取温度、提取时间、料液比四个提取工艺参数间的数学模型,确定了提取葛根总黄酮的最佳工艺条件为:溶剂浓度61.24%,提取时间1.97h,料液比1:27.70,提取温度80.86℃,在此条件下,得到的葛根黄酮提取率为6.60%。3、分别使用ZTC1+1天然澄清剂和AB-8大孔吸附树脂对葛根黄酮进行纯化研究,黄酮粗提液的纯度为14.03%,加入ZTC1+1天然澄清剂纯化后,黄酮纯度为23.93%,表明澄清剂可以去除一部分杂质,用于黄酮的纯化工艺中是可行的。详细考察了AB-8树脂纯化葛根总黄酮的工艺条件,确定了最佳吸附解析工艺条件为(树脂柱长度50cm,柱内直径2cm):葛根黄酮上样液浓度3.0mg/mL,上样液量55mL,吸附流速0.5mL/min,洗脱剂用200mL的70%乙醇,以1.0BV/h的流速洗脱,分离纯化后的葛根总黄酮产品纯度最高,可达71.21%。4、采用TLC、UV、IR、HPLC等现代分离检测技术对葛根黄酮化合物的结构进行了初步表征。结果表明葛根黄酮具有特征性的紫外和红外吸收峰,采用高效液相色谱法分析可以得到纯化前样品中葛根素的含量为20.63%,纯化后样品中葛根素的含量为52.03%。5、分别运用邻苯三酚-鲁米诺、CuSO4-Phen-Vc-H2O2和H202-鲁米诺化学发光体系测定了葛根黄酮对超氧阴离子、羟基自由基、体外双氧水的清除作用,其半数抑制浓度分别为0.1136mg/mL,0.0201mg/mL,0.0570mg/mL,同时测定了葛根黄酮对DPPH自由基的清除作用以及葛根黄酮的还原能力,清除DPPH自由基的半数抑制浓度为0.0162mg/mL。葛根黄酮具有较好的体外清除活性氧的能力,其清除作用和还原能力随着溶液浓度的增加而加强。
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