本研究利用先进的纳米技术,对传统中药紫苏子油进行改造,制备紫苏子油纳米乳。通过空白纳米乳的基础研究筛选处方,利用伪三元相图优选处方,采用滴定法制备紫苏子油纳米乳,并对其稳定性、安全性、药效学和药动学等进行较为系统的研究。研究摘要如下:1.空白纳米乳的基础研究筛选出空白纳米乳处方,制备空白纳米乳,并对其影响因素进行考察,为后续试验奠定基础。利用亲水亲油平衡值法和纳米乳的评价标准筛选出可形成纳米乳的处方;利用滴定法制备空白纳米乳;通过透射电子显微镜和激光粒度分布仪考察其形态和粒径;利用伪三元相图对纳米乳形成的影响因素进行考察。纳米乳处方筛选结果显示:可形成纳米乳的表面活性剂为吐温类(80和60)、司盘类(80和60)、蓖麻油聚氧乙烯醚-40和氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-40,助表面活性剂为无水乙醇、甘油、1,2-丙二醇和正丁醇,油相为肉豆蔻酸异丙酯、液体石蜡、橄榄油和小麦胚芽油;制备的空白纳米乳为澄清、透明、淡黄色或略带淡蓝色乳光的液体,电镜下呈圆球形,粒径为20.7 nm,亚甲基蓝染料在其中的扩散速度明显大于苏丹红III的扩散速度;纳米乳形成的影响因素考察结果显示:表面活性剂与油相的种类及比例是纳米乳形成最主要的和关键的影响因素。在能形成纳米乳范围内,表面活性剂亲水亲油平衡值越大、助表面活性剂的链越短、油相与混合表面活性剂的亲水亲油平衡值越匹配,纳米乳区越大;在一定范围内,药物加入量增加,纳米乳区增大。表明制备的空白纳米乳质量稳定,为水包油型。2.紫苏子油纳米乳的研制及质量评价制备紫苏子油纳米乳,对其质量进行评价。建立紫苏子油纳米乳含量检测的气相色谱分析方法,并考察其载药量和包封率;利用透射电子显微镜、激光粒度分布仪、旋转黏度计、折光仪和电导仪等对其形态、粒径及理化性质进行考察;通过稳定性参数测定、加速试验、光加速试验、经典恒温加速试验及纳米乳中紫苏子油的过氧化值测定考察其稳定性。气相色谱分析结果显示:制剂的标准曲线在50 ng/mL~1 600 ng/mL范围内线性关系良好,平均回收率为99.3%,回收率的RSD为0.69%,平均保留时间为33.398 min,进样重复性的RSD为0.52%和0.34%;血浆的标准曲线在10 ng/mL~1 600 ng/mL范围内线性关系良好,平均回收率为95.8%,回收率的RSD为2.95%,平均保留时间为33.545 min,进样重复性的RSD为0.58%和0.83%;质量评价结果显示:制备的氢化蓖麻油聚氧乙烯醚-40/乙醇/小麦胚芽油/紫苏子油纳米乳为澄清、透明、略带淡蓝色乳光的液体,电镜下呈球形,平均粒径为26.0 nm,包封率大于80%,粘度为5.64±0.09 mm2.s-1,折光率为1.178±0.0023 nD20,电导率为366±1.36 mS-1,Zeta电位为-2.18±0.04 mV,紫苏子油纳米乳的稳定性参数为4.60±0.16。表明本研究建立的分析方法回收率和精密度高、重复性好,可用于其质量控制和动力学研究。制备的紫苏子油纳米乳质量很稳定,符合用药要求。3.紫苏子油纳米乳的安全性评价通过家兔股四头肌注射试验、溶血性试验、血管刺激性试验、热原检测试验、小鼠急性毒性试验和细胞毒性试验对紫苏子油纳米乳的安全性进行评价。股四头肌注射试验显示:注射部位轻度充血,直径均在0.5 cm以下,属于1级;溶血性试验结果显示:试管中未见澄明红色,且红细胞全部下沉,上层液体无色澄明,经振摇后红细胞能均匀分散;血管刺激性试验结果显示:皮肤组织结构正常,表皮无增厚,皮下组织未见充血、水肿等形态学改变,耳缘静脉未见扩张,血管壁无增厚;热原检查结果显示:每只家兔的体温升高均低于0.6℃,三只家兔体温升高的总和低于1.4℃;小鼠急性毒性试验结果显示:紫苏子油纳米乳对小鼠的最大耐受量为140 g/kg,折合成人的剂量为35 000 g/kg,是临床用量的7 777倍,累积的LD50为602.0 g/kg;细胞毒性试验结果显示:紫苏子油纳米乳组细胞比正常细胞生长速度稍减慢,但形态并无明显差异,紫苏子油纳米乳的细胞毒性属于1级。表明紫苏子油纳米乳无注射刺激性,无溶血现象,热原检查符合规定,对小鼠成纤维细胞无明显的毒性作用,安全性高。4.紫苏子油纳米乳的药效学研究通过紫苏子油纳米乳对抗小鼠急性高血脂症试验、紫苏子油纳米乳对高血压大鼠血压及心率的影响试验和紫苏子油纳米乳诱导小鼠乳腺癌细胞EMT-6凋亡试验对其药效进行研究。对抗高血脂试验结果显示:腹腔注射0.25 mL/10 g 75%的蛋黄乳可成功复制小鼠急性高血脂症模型。紫苏子油纳米乳降低小鼠总甘油三酯、总胆固醇及动脉硬化指数的相对值,分别是紫苏子油软胶囊的4.48倍、2.06倍和2.61倍,是非诺贝特的4.62倍、1.28倍和1.45倍;对高血压大鼠血压及心率的影响试验结果显示:紫苏子油纳米乳与模型组比较,血压降低28%(P<0.01),心率增快14% (P<0.01),心指数降低19% (P<0.01);紫苏子油纳米乳诱导EMT-6细胞凋亡试验结果显示:浓度为100μg/mL~800μg/mL时的紫苏子油纳米乳较紫苏子油软胶囊对EMT-6细胞的诱导凋亡作用强,差异显著(P<0.05),透射电镜下,EMT-6细胞染色质边集,胞质内出现空泡,形成凋亡小体。800μg/mL剂量紫苏子油纳米乳处理EMT-6细胞48 h后,凝胶电泳可见明显的“阶梯状”DNA条带,约为180~200 bp整数倍递增分布。800μg/mL剂量紫苏子油纳米乳处理EMT-6细胞24 h后,可见凋亡峰出现,且峰值随处理时间的延长而增高。表明紫苏子油纳米乳能显著降低小鼠血浆总甘油三酯,总胆固醇和低密度脂蛋白,并提高高密度脂蛋白;紫苏子油纳米乳能显著降低高血压大鼠血压;紫苏子油纳米乳具有明显的诱导EMT-6细胞凋亡的作用。制备的紫苏子油纳米乳药效比紫苏子油软胶囊显著提高。5.紫苏子油纳米乳的药物代谢动力学研究对紫苏子油纳米乳在家兔体内的药动学进行研究。给家兔灌胃25 mL/kg紫苏子油纳米乳,于给药后0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h、3h、3.5h、4h、8h、10h、12h、14h、18h、24 h经心脏采血1 mL,用气相色谱法测定家兔血浆中的α-亚麻酸含量,用残数法对药-时曲线进行拟合,计算出药动学参数。药动学结果显示:在家兔体内,紫苏子油纳米乳符合有吸收的一室模型。紫苏子油纳米乳的平均达峰时间为4.929 h,比紫苏子油软胶囊的3.279 h延长了1.650 h;理论平均最高血药浓度Cmax(136.058μg/L)是紫苏子油软胶囊(110.237μg/L)的1.2倍;相对生物利用度是紫苏子油软胶囊的283.1%。表明紫苏子油纳米乳较紫苏子油软胶囊的相对生物利用度明显提高,且具有一定的缓释作用。本研究制备的紫苏子油纳米乳质量稳定、安全性高,与传统剂型比较药效显著提高。已申请国家发明专利,申请号为200610104621.X。