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目的:本研究采用体外细胞培养技术,建立大鼠骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal stemcells,BMSCs)的体外培养体系,通过研究槲皮素(Quercetin,Que)对MSCs增殖和骨向分化的影响,从干细胞及以药证理的理路,探索补肾中药在骨代谢疾病中的新应用。方法:1.运用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,最大限度的获得MSCs;2.通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物及分化能力鉴定所取得的细胞为MSCs;3.运用MTT法检测不同浓度槲皮素对大鼠MSCs增殖的影响,以确定其最佳促增殖剂量;通过ALP阳性细胞计数,确定槲皮素最佳促MSCs骨向分化剂量。实验分为空白组、经典诱导组(地塞米松+β-甘油磷酸钠+维生素C)、槲皮素组,通过检测诱导分化过程中ALP活性和钙化结节数目,来观察槲皮素对MSCs骨向分化能力的影响;4.RT-PCR的方法检测槲皮素调控MSCs骨向分化过程中相关蛋白BMP-2 mRNA的影响。结果:1.MSCs分离后24 h基本贴壁,11-15 d基本融合,传代后呈成纤维细胞样生长,增殖能力较强。2.经MTT法检测槲皮素能够促进MSCs增殖,以5μmol/L和10μmol/L两个浓度最为明显。3.ALP染色阳性表达率结果显示:10μmol/L槲皮素与空白组比有统计学意义(P＜0.05)。4.细胞培养15 d后,槲皮素组培养液中的ALP活性与空白组间有显著差异(P＜0.05),而经典诱导组与槲皮素组间有显著差异(P＜0.05)。细胞培养21 d后,矿化结节计数结果显示:槲皮素组与空白组间有显著性差异(P=0.000＜0.05),而经典诱导组与槲皮素组间无显著性差异(P=0.092＜0.05)。5.槲皮素可以上调MSCs骨向分化过程中BMP-2 mRNA的表达,槲皮素组、经典诱导组与空白组间相比均有显著性差异,有统计学意义(P＜0.05),槲皮素组与经典诱导间相比有显著性差异(P=0.000＜0.05)。结论:采用全骨髓贴壁法可获得增殖能力强,纯度较高的大鼠MSCs;槲皮素能促进MSCs的增殖和骨向分化;在MSCs骨向分化过程中,10μmol/L槲皮素可以上调BMP-2 mRNA的表达,槲皮素对MSCs的这种作用可能是其促进骨折愈合、防治OP的细胞学机制之一。