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目的G-CSF动员健康供者后,定量测量外周血及骨髓采集物CD34~+细胞及其CD34~+CD61~+亚群,探索巨核前体细胞CD34~+CD61~+亚群输注量与异基因外周血和/或骨髓移植后血小板恢复时间是否相关。材料和方法一、材料(一)试剂1、PE标记鼠抗人CD61抗体,FITC标记的鼠抗人CD34(HPCA-2)抗体,鼠IgG2a-FITC,鼠IgG2a-PE同型对照(1ml:100tests美国exalpha公司产品)2、淋巴细胞分离液(比重:1.077g/ml上海试剂总厂)3、红细胞裂解液(100ml,百亿生物技术公司)4、牛血清白蛋白(50g,百亿生物技术公司)(二)设备1、血细胞分离机(CS-3000 plus型美国Baxter公司)2、流式细胞仪(EpicsXL型,Coulter,USA)二、方法1、病人特征2007年4-10月期间,24例不同血液病患者接受HLA全相合同胞,非血缘供者或单倍体相合同胞移植,20例可评估的患者依移植方法不同分为两组,HLA全相合组采用PBSC方案,单倍体相合组采用PBSC+BM联合移植方案。2、动员过程,外周血和骨髓采集供者应用rhG-CSF 5ug/kg/d,每日两次皮下注射。HLA全相合组供者第4,5天采集外周干细胞,单倍体相合组第4天采集外周干细胞,第5天采集骨髓。3、流式细胞仪测量外周干细胞和骨髓样本分类计数后,通过流式细胞仪立即测定或隔夜保存后测定CD34~+CD61~+亚群。5×10~6细胞与不同抗体暗处冰浴30分。4、预处理,GVHD经验预防和植入定义以Bu/CY/Ara-c或CY/TBI/Ara-c为主要预处理方案,GVHD经验预防采用ATG/CSA/MTX/MMF方案,于移植后7-10天,rhG-CSF始用于促进造血恢复。血小板植入时间定义为零期后首个连续7天的脱离血小板输注血小板计数＞20X10~9/l。5、统计分析SPSS13.0版的统计软件用于数据分析。受者输注CD34~+细胞和CD34~+CD61~+,CD34~-CD61~+亚群每公斤体重细胞数,被表示成平均值±标准差,最小值,最大值,中位值。二个组比较采用非参数的t检验(Mann-Whimey test)方法。使用spearman相关分析CD34~+细胞和/或CD34~+CD61~+的亚群的输注量与血小板植入时间之间相关关系。Kaplan-Meier法用于评估接受大于和小于阈值量患者植入动力学中的不同,统计的显著性由log rank检验。p值＜0.05考虑为有显著性。结果1、单倍体相合组输注CD34~+,CD34~+CD61~+,CD34~-CD61~+细胞数中位值分别为6.24x10~6/kg(1.53～20.48),66.19×10~4/kg(8.16～493.83),34.38x10~6/kg(14.71～109.16),HLA全相合组中位值分别为4.88x10~6/kg(1.00～8.24,),14.16×10~4/kg(11.63～96.87),和13.50×10~6/kg(1.74～35.61),两组输注CD34~+CD61~+细胞数差异有显著性(p=0.031)。2、血小板计数＞20x10~9/l的中位时间,单倍体相合组为:16.5(9.00～35.00)天,HLA全相合组植入时间为:10.5(6.00～37.00)天,两组血小板的植入时间差别无显著性。3、对于两组中CD34~+细胞量＞2x10~6/kg的受者,HLA全相合组CD34~+CD61~+细胞量中位值为14.93×10~4/kg,单倍体相合组CD34~+CD61~+细胞量中位值为76.76x10~4/kg,两组输注CD34~+CD61~+细胞数差异存在显著性(p=0.006)。分析两组血小板的植入时间,差别有显著性(p=0.006)。4、CD34~+CD61~+亚群细胞输入量与血小板植入时间相关性明显优越于CD34~+细胞输入量血小板植入时间的相关性,可评估20例受者CD34~+细胞群相关系数(r=-0.449 p=0.047),单倍体相合组12例CD34~+CD61~+亚群(r=-0.768 p=0.004),HLA相同组8例CD34~+CD61~+亚群(r=-0.747 p=0.033),CD34~+CD61~+亚群与血小板的植入时间有负相关关系,输注CD34~+CD61~+亚群细胞量大,血小板的植入时间缩短。结论异基因造血干细胞移植后,每公斤体重输注CD34~+CD61~+细胞亚群的量和血小板的植入时间有显著的相关,通过流式细胞仪测定巨核前体细胞的数目能够预测血小板重建的能力,对单倍体相合外周血和骨髓联合移植后预测同样有效。在移植CD34~+细胞量＞2X10~6/kg前提下,虽然单倍体组获得较高的CD34~+CD61~+细胞量,单倍体组血小板恢复时间并不优于全相合组,全相合组血小板恢复较快。