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近年来,随着养殖水环境的恶化,环境胁迫对水产动物免疫机能影响的研究已倍受关注。本试验以pH7.8的自来水为对照,用不同pH(4.5,6.0,7.5,9.0,10.5)和不同浓度的硫酸铜(0.0625,0.125,0.25,0.5,1 mg／L)分别胁迫中华绒螯蟹10 d,在试验开始后第1、4、7、10 d采样检测有关免疫指标的变化,以评价pH和Cu2+胁迫对其非特异性免疫功能的影响。
pH胁迫试验结果显示:pH4.5、pH6.0、pH9.0和pH10.5组中华绒螯蟹的血细胞总数(THC),pH4.5组的血细胞吞噬百分率(PP)在整个试验期均显著低于对照组(P<0.05)；pH4.5、pH6.0、pH9.0和pH10.5组的血清溶菌酶(LSZ)活性,pH4.5组和pH10.5组的肝胰腺总抗氧化能力(T-AOC),pH10.5组的PP、血清超氧化物岐化酶(SOD)活性,pH4.5组的肝胰腺一氧化氮(NO)含量、血细胞破碎物上清液(HLS)中的酚氧化酶(PO)活性分别在试验开始后4～10 d、10 d、1～4 d、1～7 d、7～10d、7 d显著低于对照组(P<0.05)。pH4.5、pH6.0、pH9.0和pH10.5组的血清过氧化氢酶(CAT)活性、肝胰腺丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,pH4.5、pH6.0和pH9.0组的血清SOD活性,pH9.0组和pH10.5组的肝胰腺天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性在整个试验期几乎均显著高于对照组(P<0.05)；pH10.5组的NO含量在整个试验期均显著高于对照组(P<0.05)；pH4.5组和pH6.0组的肝胰腺T-AOC、丙二醛(MDA)含量,pH6.0组的HLS中的PO活性、血清碱性磷酸酶(ALP)活性,pH4.5组的呼吸爆发(RP)活性、pH10.5组的血清酸性磷酸酶(ACP)活性均在试验开始后1d显著高于对照组(P<0.05);pH9.0组和pH10.5组的血清过氧化物酶(POD)活性均在试验开始后4 d显著高于对照组(P<0.05)；pH4.5组和pH6.0组的血清POD活性,pH4.5、pH6.0、pH9.O和pH10.5组的肝胰腺MDA含量均在试验开始后10 d显著高于对照组(P<0.05)。各pH处理组血细胞的吞噬指数无显著差异(P>0.05),pH7.5组的所有免疫指标与对照组均无显著差异(P>0.05)。
硫酸铜暴露试验结果显示:0.0625、0.125、0.25、0.5和1 mg／L五个试验组的血清LSZ、POD、CAT活性、肝胰腺ALT、AST活性、NO含量和T-AOC在或几乎在整个试验期均显著高于对照组(P<0.05)；5个试验组的肝胰腺MDA含量在试验开始后1～7天均显著高于对照组(P<0.05):0.25 mg／L以上组的HLS中的PO活性和血清ALP活性在试验开始后1天,显著高于对照组(P<0.05)；0.125 mg／L组的THC、0.5 mg／L和1 mg／L组的血细胞RP活性、0.5 mg／L和1 mg／L组的血清ACP活性在试验开始后1～4 d均显著高于对照组(P<0.05),0.0625 mg／L和0.125mg／L组的RP活性和ACP活性分别在试验开始后7～10 d、10 d显著高于对照组(P<0.05)。与此相对,五个试验组的血清SOD活性几乎在整个试验期均显著低于对照组(P<0.05),五个试验组的血清ALP活性在试验开始后7～10 d显著低于对照组(P<0.05)；1 mg／L组的THC、HLS中的PO活性,0.25 mg／L以上组的PP、0.125mg／L组的血清ALP活性分别在试验开始后1～7 d、4～7 d、1～7 d、4 d显著低于对照组(P<0.05)。6个处理组血细胞的吞噬指数(PI)无显著差异(P>0.05)。上述结果表明,THC、NO、LSZ、SOD、POD、CAT、T-AOC、MDA、ALT及AST对硫酸铜暴露较为敏感,可作为pH对中华绒螯蟹免疫功能影响检测与评价的主要指标。
本研究结果表明:养殖环境中低酸性pH(4.5)、高Cu2+(1 mg／L)胁迫对中华绒螫蟹非特异性免疫的影响较大；THC、LSZ、SOD、CAT、MDA、ALT及AST等免疫指标对pH胁迫和硫酸铜暴露较为敏感,此外,PP也对pH胁迫敏感,NO、POD及T-AOC也对硫酸铜暴露敏感,可分别作为pH和硫酸铜对中华绒螫蟹免疫功能影响检测与评价的主要指标。