小球藻胞外多糖的分离纯化及其抗氧化和抗炎症活性研究

来源 :湘潭大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ouyang0078
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多糖是构成生命的四大基本物质之一,几乎在所有生物中都有分布。目前,多糖因具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、降血脂等众多的生物活性,已成为了低毒、高效天然产物研究领域的一大热点。而微藻多糖的结构与活性随藻种属及培养条件不同而具有显著差异,是天然活性多糖研究的重要资源。本论文以原始小球藻(Chlorella protothecoides)为受试对象,考察了光照时长和盐胁迫对其胞外多糖产量的影响。此外,进一步地纯化小球藻分泌的胞外多糖,并分析其结构特征、探究其生物活性,取得的主要成果如下:1)本研究发现光照周期和培养基盐度对小球藻胞外多糖的分泌具有显著影响,与正常培养基盐度、全黑暗异养培养条件相比,光照:黑暗周期为8h:16h,培养基盐度为10‰时,小球藻胞外多糖产量增加60%,其值为0.297±0.01 g/L。2)通过醇沉浓缩、Sevag除蛋白、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析后,纯化得到分子质量分别为131 k Da和170k Da的单一多糖组分CPEPS-A1和CPEPS-B1。3)进一步分析多糖的化学组成发现CPEPS-A1和CPEPS-B1都是由糖和脂质组成的复合物,其中CPEPS-A1组分中糖成分所占质量比重为62.66±0.42%,由木糖、甘露糖和核糖按摩尔百分比19.81:79.93:0.25组成,CPEPS-B1组分的糖成分所占质量比重为82.58±1.69%,单糖组分为鼠李糖、木糖、甘露糖和葡萄糖,其摩尔百分比为10.22:46.10:17.98:25.62。进一步采用红外光谱和核磁共振波谱法表征小球藻胞外多糖结构,结果表明CPEPS-A1和CPEPS-B1组分的多糖结构中均具有α和β糖苷键构型,但CPEPS-A1由一个α型糖环和两个β型糖环的单糖组成,CPEPS-B1的单糖构成单元含有一个α型糖环和三个β型糖环。4)小球藻胞外多糖体外抗氧化活性和抗炎症活性的初步分析结果表明,两种多糖对超氧阴离子、DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基均表现出较强的清除能力,其中CPEPS-A1组分对DPPH自由基、羟基自由基和ABTS自由基具有更强的清除活性,其半抑制浓度分别为0.103±0.001、0.362±0.003和0.093±0.003 mg/m L;同时,CPEPS-A1和CPEPS-B1组分都能明显抑制脂多糖(LPS)诱导的炎症因子分泌,其抗炎症活性基本与多糖作用浓度呈正相关关系,其中CPEPS-B1组分具有更显著的抗炎症能力,当作用浓度为1000μg/m L时,小鼠巨噬细胞RAW 264.7内i NOS含量以及释放的ROS、IL-6和TNF-α含量分别下降48.6%、55.4%和59.1%。以上研究结果初步探究了光照时长和盐度胁迫对小球藻胞外多糖产量的影响,选取了合适的光照和盐度胁迫显著提高了多糖产量,同时,本研究鉴定了小球藻胞外多糖CPEPS-A1和CPEPS-B1组分的单糖组成、官能团、糖苷键和糖环构型,也对两种多糖的抗氧化活性和抗炎症活性进行了探究,为小球藻胞外多糖的开发及利用提供理论基础。
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